抗羊布鲁菌OMP22蛋白的单克隆抗体的制备

【作者】 张蕾； 张亮； 李璞媛； 李凯； 于澜； 吴兴安； 张芳琳； 徐志凯；

【机构】 第四军医大学微生物学教研室；

【摘要】 目的:表达并纯化羊布鲁菌OMP22蛋白,制备其单克隆抗体(mAb)。方法:采用GST亲和层析纯化的方法纯化OMP22蛋白。用灭活的羊布鲁菌M5株免疫小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合,用纯化的OMP22蛋白ELISA间接法筛选阳性克隆,3次克隆化后建立杂交瘤细胞系。采用小鼠腹腔接种杂交瘤细胞制备腹水,正辛酸-硫酸铵法纯化mAb。采用Western-blot、ELIS A以及表位相加试验等方法鉴定mAb特性。结果:经亲和层析纯化,获得纯化OMP22蛋白;Western-blot检测结果显示所获蛋白可与兔抗布鲁菌阳性血清特异性反应。获得2株mAb,分别命名为1A5、2D8。结论:获得了纯化的OMP22蛋白;制备了2株BCSP31特异性mAb,即1A5、2D8。OMP22蛋白的纯化及其mAb的制备为布鲁菌病的诊断与防治奠定了一定的物质基础。更多还原