重组小鼠β-防御素2的纯化及其体外抗NTHi活性的研究

【作者】 姚锋； 邵京京； 李明远； 陆顺顺； 孟俊杰； 桑云璐； 李婉宜；

【机构】 四川大学华西基础医学与法医学院微生物教研室；

【摘要】 目的:在原核系统中表达并纯化重组MBD2融合蛋白,并对其体外抗NTHi的活性进行初步研究。方法:利用本实验室已经构建好的原核表达质粒PET32-mBD2,在优化的表达条件下诱导重组质粒高效表达;采用亲和层析法对目的蛋白进行纯化,肠激酶切除标签蛋白,获得成熟的重组MBD2;SDS-PAGE分析重组MBD2的分子量大小及表达情况;体外抑菌实验观察重组蛋白浓度、作用时间、外界环境中的盐离子浓度及重组蛋白构象改变对重组MBD2抗菌活性的影响。结果:SDS-PAGE分析显示表达产物在酶切前后均获得了单一的目的条带,与理论重组蛋白的分子量大小相符。酶切前后的纯化产物经超滤浓缩后,测得其蛋白浓度分别为1.2g/L及7.5mg/L。体外抑菌实验结果显示,重组MBD2体外具有明显的抗NTHi活性,培养120min后,其最小抑菌浓度(MIC)值为40μg/ml,最小杀菌浓度(MBC)值为160μg/ml。重组MBD2的抗菌活性随着其浓度的增加及作用时间的延长而增强,但外环境NaCl浓度的增高及重组蛋白二硫键的破坏会抑制其抗菌活性。结论:MBD2蛋白在原核系统中获得较高浓度和纯度的表达,重组MBD2对NTHi具有杀菌作用,其杀菌作用除受本身的浓度和构象影响外,还受作用时间及外环境中无机盐浓度的影响。更多还原