第1类整合子不同可变区启动子对其下游基因盒表达水平的影响

【作者】 魏取好； 蒋晓飞； 李敏； 吕元；

【机构】 浙江省人民医院检验中心； 复旦大学附属华山医院检验医学科；

【摘要】 目的:整合子可通过位点特异性重组捕获与表达外源基因盒,与细菌耐药基因的水平转移密切相关。第1类整合子中绝大多数耐药基因盒的表达依赖上游可变区启动子,而耐药基因的表达水平直接关系到宿主菌的耐药表型,因此本研究对第1类整合子不同可变区启动子下游基因盒的相对表达水平进行研究。方法:通过定点突变构建8种含有不同可变区启动子整合子的重组质粒,运用实时荧光定量PCR检测不同可变区启动子下游报告基因盒中aadA2基因的转录水平,Western blot检测aadA2基因的翻译产物氨基糖昔-3"-腺苷酰基转移酶^[AAD（3"）]的表达水平,同时用微量肉汤稀释法检测链霉素对含有不同可变区启动子整合子重组质粒的大肠杆菌JM109的最小抑菌浓度。结果:不同可变区启动子下游基因盒中基因的转录水平可相差上百倍,强P_ant启动子联合有活性的P2启动子下游aadA2基因的表达水平最高,比表达水平最低的弱P_ant启动子下游aadA2基因在转录水平要高出约200倍,在翻译水平要高出约16倍,链霉素对其最小抑菌浓度分别为256 mg/L和4 mg/L。有活性P₂启动子下游aadA2基因的相对转录水平均高于其相对应的无活性P₂启动子下游aadA2基因的相对转录水平。首次检测了杂合2型P_ant启动子联合有活性的P₂启动子下游基因盒中aadA2基因的表达水平,发现其为强启动子,相对强度仅次于强P_ant启动子联合有活性的P₂启动子及强P_ant启动子。结论:第1类整合子可变区启动子可影响其下游耐药基因盒中耐药基因的表达水平及宿主菌的耐药水平,在对临床菌株进行第1类整合子分子流行病学调查时应重视可变区启动子分类方面的研究。更多还原