第28家族多聚半乳糖醛酸酶分子改良研究

【作者】 罗艳； 涂涛； 罗会颖； 姚斌；

【机构】 中国农业科学院饲料研究所；

【摘要】 多聚半乳糖醛酸酶是研究最广泛的商业果胶酶之一。广泛用于食品,饲料,造纸,纺织,燃料和化学工业上。此外,果胶酶还可以用于生产果胶寡糖,在抗肥胖和抗氧化方面有一定的作用。在CAZy数据库中显示,有3000多个多聚半乳糖醛酸酶属于28家族糖基水解酶,其中,有几个真菌多聚半乳糖醛酸酶最适温度高于60℃为最适。为了更好的应用于工业生产,挖掘高比活和高催化效率的果胶酶和利用蛋白质工程,分子生物学对果胶酶进行改造具有重要的意义。本研究从真菌中克隆得到了一个28家族的多聚半乳糖醛酸酶TePG28b基因,经过酶活测定,TePG28b对聚半乳糖醛酸的比活性为25900±502U/mg。最适作用温度为70℃,最适作用pH为3.5,为了提高其催化效率,经过多序列比对和Discovery studio软件分析,在其拇指loop上找到三个位点,成功构建了四个突变体,N85E,S86W△S88N85E/S86W.并己成功酵母表达。经过酶活测定发现突变体N85E催化效率比野生型TePG28b提高了0.3倍,△S88突变体催化效率比野生型TePG28b提高了0.17倍,如表1数据所示。更多还原