克氏原螯虾新型过敏原的鉴定与性质研究

【作者】 杨阳； 张永霞； 陈仲玮； 张明莉； 曹敏杰； 苏文金； 刘光明；

【机构】 集美大学食品与生物工程学院水产品深加工技术国家地方联合工程中心； 厦门市第二医院；

【摘要】 目的:克氏原螯虾是重要的过敏食物之一,其引发过敏安全问题亟需改善,在克氏原螯虾中是否还存在新型过敏原、致敏性如何都有待进一步探究。本研究旨在分析鉴定克氏原螯虾中存在的新型过敏原。方法:以克氏原螯虾为实验对象,通过硫酸铵盐析和柱层析的方法,从肌浆中提取纯化目的蛋白,并对纯化的蛋白进行MALDI-TOF质谱鉴定。利用过敏患者血清,采用dot blot确认纯化蛋白的致敏性。通过SDS-PAGE、native-PAGE、Western blot、dot blot及抑制性ELISA等方法对过敏原的理化特性、消化稳定性进行分析。利用表面等离子共振技术检测蛋白间的相互作用,并结合噬菌体展示技术分析确定过敏原的抗原表位。结果:纯化的28 kDa蛋白经质谱鉴定为磷酸丙糖异构酶(triosephosphate isomerase,TIM),血清学鉴定能够与过敏患者血清IgE发生特异性结合。另一能够识别结合兔抗小龙虾TIM-IgG的90 kDa蛋白经纯化鉴定后确认为细丝蛋白C(filamin C,FLN c),该蛋白与TIM具有相似的理化特性、消化稳定性,并存在IgG/IgE交叉反应性。通过噬菌体展示技术确定了TIM具有5个构象表位和3个线性表位,FLN c具有9个构象表位和10个线性表位,比较分析二者的抗原表位后发现TIM和FLN c存在共同表位。结论:TIM和FLN c是克氏原螯虾的两个新型过敏原,二者所具有的共同表位导致了其相似的特性及交叉反应性。更多还原