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结核杆菌Hsp16.3蛋白的构建、表达与分离纯化
【机构】 沈阳药科大学；
【摘要】 研究目的:结核病依然是对人类健康具有极大威胁的传染性疾病之一,而结核分枝杆菌能在巨噬细胞内长期存活是其引起结核病的主要因素之一。近年研究发现结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3是在结核分枝杆菌进入宿主巨噬细胞后大量表达的一个存在于膜上的主要抗原蛋白。本实验对Hsp16.3蛋白进行了构建、表达及分离纯化,为结核病诊断的后续研究工作奠定基础。研究方法:本实验以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板对目的基因Hsp16.3进行扩增。扩增产物经双酶切后胶回收,将其连接至表达载体p ET-28a,连接产物转化入大肠杆菌BL 21感受态细胞,挑选阳性重组子送测序。取测序正确的菌液进行诱导表达,表达产物经电泳分析,主要以可溶性形式存在,菌体超声破碎,离心获得上清液,采用金属离子螯合层析(Chelating Sepharose Fast Flow)方法对目的蛋白进行分离纯化。结论与讨论:本实验成功构建了重组载体p ET-28a-HSP 16.3,目的蛋白经可溶性分析90%存在于菌体破碎上清中,利用金属螯合层析分离纯化Hsp16.3蛋白,经电泳验证可达到电泳纯。
- 【会议录名称】 第五届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会论文集
- 【会议名称】第五届泛环渤海生物化学与分子生物学会学术交流会
- 【会议时间】2015-08-19
- 【会议地点】中国辽宁丹东
- 【分类号】R378.911
- 【主办单位】北京市生物化学与分子生物学会、天津市生物化学与分子生物学会、河北省生物化学与分子生物学会、山西省生物化学与分子生物学会、内蒙古生物化学与分子生物学会、辽宁省生物化学与分子生物学会、吉林省生物化学与分子生物学会、黑龙江省生物化学与分子生物学会、山东省生物化学与分子生物学会