抗大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白H抗原单克隆抗体的制备和鉴定

【作者】 蔡冉； 许桂丽； 周洁； 张素芬； 袁敬宇； 尚彦红； 徐悦玥； 马颖； 周婷婷； 潘英； 李素芹； 李越希；

【机构】 南京军区军事医学研究所；

【摘要】 目的:鞭毛蛋白(H7)是肠出血性大肠杆菌重要的毒力因子,其编码基因为flic。主要由三部分区域组成:两端高度保守的C1区和C2区及中间高变C3区。H7鞭毛在启动O157:H7与肠道黏膜、黏液或者同时与两者结合过程中发挥着重要作用。本研究通过免疫重组抗原flic,制备抗flic单克隆抗体,为进一步建立快速,高效的检测O157:H7方法奠定了基础。方法:以表达纯化的重组蛋白flic为免疫抗原免疫BALB/C小鼠,待小鼠血清效价较高时,使用杂交瘤技术并对阳性融合孔多轮亚克隆建立单克隆细胞株,小鼠腹腔注射单克隆细胞诱生腹水并纯化,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶联免疫吸附试验和免疫印迹法对纯化的单克隆抗体的亚型,效价,浓度,纯度,特异性等性质进行鉴定。结果:获得了一株针对抗大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白H抗原的单克隆细胞株,命名为B7E10E4。结论:本研究获得了一株能稳定分泌抗大肠杆菌O157:H7鞭毛蛋白H抗原的单克隆细胞株,经过三轮亚克隆,间接ELISA法显示所有孔均呈阳性,Western Blot验证同样正确。将细胞冻于液氮后,复苏仍能正常生长并分泌抗体。本研究为进一步建立快速、高效的O157:H7检测方法奠定了良好的基础。更多还原