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骨唾液酸蛋白糖基化修饰对成骨的影响及可能的作用机制
【机构】 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院生物化学与分子生物学系；
【摘要】 目的:探讨骨唾液酸蛋白(Bone Sialoprotein,BSP)糖基化修饰对成骨的影响及可能的作用机制。方法:建立MC3T3-E1 Subclone 14成骨细胞培养模型,并分别加入人重组骨唾液酸蛋白(Recombinant Human Bone Sialoprotein,rhBSP),肽N-糖苷酶F、O-糖苷酶及唾液酸酶消化的rhBSP,使用荧光标记的具有特异识别N、O-糖链及唾液酸结构的凝集素检测细胞中各自糖链的变化,并通过流式细胞仪验证;同时利用ALP、von Kossa染色及RT-PCR、Western-blot等成骨细胞生物学检测手段观察BSP糖基化修饰对成骨的影响。结果:成功建立了MC3T3-E1 Subclone 14成骨细胞培养模型,证明MC3T3-E1 Subclone 14细胞培养至10d左右ALP染色呈强阳性反应,即成骨细胞大量形成,von Kossa染色至14d左右呈强阳性反应,说明成骨细胞分泌的骨基质进入矿化期。在成骨细胞培养模型中加入各种糖基化修饰的rhBSP,ALP、von Kossa染色结果显示:BSP O-糖基化和N-糖基化修饰对成骨细胞和骨矿化具有完全不同的影响。进一步研究表明这一作用可能是通过影响维生素D受体VDR的表达,从而影响骨的矿化,但对成骨细胞的分化无明显影响。同时我们利用现有的质谱技术初步分析了BSP的糖链结构,进一步证实BSP的糖基化分子结构及选择性作用。
- 【会议录名称】 第八届全国医学生物化学与分子生物学第五届全国临床应用生物化学与分子生物学2013华东六省一市生物化学与分子生物学联合学术研讨会论文汇编
- 【会议名称】第八届全国医学生物化学与分子生物学第五届全国临床应用生物化学与分子生物学2013华东六省一市生物化学与分子生物学联合学术研讨会
- 【会议时间】2013-08-19
- 【会议地点】中国山东青岛
- 【分类号】R3411
- 【主办单位】中国生物化学与分子生物学会医学生物化学与分子生物学分会、中国生物化学与分子生物学会临床应用生物化学与分子生物学分会、华东六省一市生物化学与分子生物学学会、江苏省生物化学与分子生物学学会、上海市生物化学与分子生物学学会、浙江省生物化学与分子生物学学会、安徽省生物化学与分子生物学学会、福建省生物化学与分子生物学学会、江西省生物化学与分子生物学学会、山东省生物化学与分子生物学学会