基于小鼠LEC/Hca-F模型的Fucoidan抗淋巴道转移机制研究

【作者】 刘志超； 王培胜； 滕洪明； 杨亚宗； 魏恒云； 刘尊东； 邹向阳；

【机构】 大连医科大学；

【摘要】 转移是恶性肿瘤重要的生物学特征之一,也是肿瘤病人预后不良、治愈困难和死亡的危险因素。临床资料显示,在肿瘤转移方式(直接浸润周围组织、血管转移、淋巴管转移和种植转移)中,淋巴道转移是肿瘤转移的最初途径,占50%以上。Fucoidan是富含岩藻糖和硫酸酯基的水溶性杂聚糖,目前发现仅存在于褐藻和某些棘皮动物,如海参、海胆体内。而褐藻来源的Fucoidan具有独特的分支结构,并且不同种属具有不同比例的半乳糖、木糖、甘露糖和糖醛酸等。Fucoidan具有抗凝血、抗血栓、免疫调节、抗肿瘤等活性,是重要的海洋药源物质。本研究参照Mancardi方法并改良,诱导小鼠良性淋巴管瘤,培养获得小鼠淋巴管内皮细胞(LEC),并研究Fucoidan对LEC细胞生长、增殖、迁移和细胞骨架重塑以及淋巴管生成的影响,对VEGF-C活化的RTK/PI3K/Akt和Ras/ERK1,2信号途径状态的影响;以小鼠Hca-F肝癌淋巴道转移模型,采用体外实验研究Fucoidan对小鼠肝癌细胞Hca-F生长、侵袭转移、与淋巴结组织黏附的影响,ELISA法、Western-blot和Real-Time PCR法检测Fucoidan对Hca-F细胞分泌VEGF-C、MMP-2,-9水平,TIMP-1、CD44 v6、Integrinα5β1的mRNA和蛋白水平变化。采用移植瘤实验,IHC法检测Fucoidan对Hca-F实体瘤微淋巴管密度(MLVD)、腋下淋巴结转移率及转移、黏附相关蛋白的水平。实验结果显示,Fucoidan抑制LEC细胞生长、迁移及淋巴管生成;抑制Hca-F细胞增殖、迁移侵袭和黏附能力,下调VEGF-C、MMP-2/-9、CD44v6和Integrin cα5β1的表达,增加TIMP-1表达与分泌。提示,Fucoidan干预Hca-F细胞淋巴道转移,可能与影响VEGF-C所致RTK/PI3K/Akt和Ras/ERK1,2信号通路活化状态,抑制LEC细胞生长和淋巴管生成作用;也与下调Hca-F细胞中侵袭、黏附相关因子表达有关。更多还原