肝细胞GABA能信号系统在急性酒精肝损伤中的保护作用

【作者】 王双连； 罗丹；

【机构】 山东大学基础医学院；

【摘要】 目的:本研究利用急性酒精肝损伤小鼠模型,基于内质网应激(ERSR)探讨肝细胞GABA能信号系统拮抗酒精肝毒性作用的机制。方法:C57BL/6小鼠,建立酒精性肝损伤小鼠模型。检测外源性GABA或GABAAR选择性激动剂及阻断剂预处理模型小鼠体内相关指标的变化,以此评价ERSR水平,如:免疫荧光和Western Blot等方法检测酒精对肝细胞GABA能信号系统的调节情况及ERSR标志物GRP78、CHOP、PERK、caspase3等的表达情况;此外,对小鼠进行不同时间点的酒精处理,并将小鼠称重后用10%水合氯醛麻醉,心脏取血,离心后放于4℃冰箱用于检测ALT和AST水平;取出肝脏称重后取10%肝组织用于组织匀浆,进行Western Blot实验做相关蛋白的分析,剩余肝组织一半置于10%福尔马林固定48h后行常规石蜡切片评价肝组织的病理学变化,另一半置于-80℃冰箱备用。结果及结论:与生理盐水处理的小鼠相比,谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decar boxylase,GAD)和GABAAR亚单位的蛋白表达水平在酒精处理的小鼠肝脏中明显升高。与小鼠实验的结果相似,我们利用临床上因外伤行肝部分切除术的肝脏标本行免疫荧光染色发现,在具有5年以上酗酒史的病人肝脏中,GAD的表达水平也显著高于不酗酒的病人。用GABA或者选择性GABA_AR激动剂预处理小鼠后,酒精导致的肝损伤可被明显改善,但是GABA_AR阻断剂却不能逆转酒精的肝毒性作用。研究发现肝细胞GABA-GABAAR系统的肝保护作用可能与其下调酒精选择性诱导激活的内质网应激反应(ERSR)中IRE1_α-ASK1-JNK信号通路有关。本课题的研究将对临床上认识酒精导致的肝功能损伤提供新的思路,为临床上治疗和防治酒精性肝病提供新的理论依据。更多还原