Rho激酶抑制剂对日本血吸虫感染小鼠肝纤维化形成的影响

【作者】 杨莹莹； 范小琳； 邱苏赣； 许永良； 周永华； 杨俊齐；

【机构】 卫生计生委寄生虫病预防与控制重点实验室江苏省寄生虫病分子生物学重点实验室江苏省血吸虫病防治研究所；

【摘要】 目的:观察Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔对小鼠日本血吸虫感染肝纤维化形成的影响。方法:将40只6周龄C57BL/6J雌性小鼠分为4组,分别为感染组、治疗组Ⅰ即法舒地尔低剂量组、治疗组Ⅱ即法舒地尔高剂量组和健康对照组。感染组和法舒地尔治疗组小鼠均经腹部贴片感染日本血吸虫尾蚴(15±1)条/鼠。感染后3周,治疗组Ⅰ和Ⅱ分别腹腔注射法舒地尔(10mg/kg/d),腹腔注射法舒地尔(30mg/kg/d),1次/天,连续5周,感染组和健康对照组腹腔注射等体积的无菌PBS。末次注射12h后,所有小鼠采血并分离血清备检;取肝脏多聚甲醛固定、切片,苏木素-伊红(HE)染色和天狼星红染色镜检;检测各组小鼠肝脏羟脯氨酸含量,以及应用实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Col-Ⅲ)及TGF-β的mRNA水平;无菌取小鼠脾脏,制备脾脏单细胞悬液,PMA/Ionomycin和Golgistop体外培养6小时,收集细胞做细胞内因子染色。结果感染组小鼠肝内汇管区和虫卵肉芽肿周围炎症细胞浸润,胶原纤维增生。感染组、治疗组Ⅰ、治疗组Ⅱ肝脏羟脯氨酸含量分别为(412.5±36.1)ug/g肝湿重、(341.4±89.7)ug/g肝湿重和(354.5±76.2)ug/g肝湿重,治疗组Ⅰ和Ⅱ组小鼠肝脏羟脯氨酸含量均显著低于感染组(P<0.05);治疗组Ⅰ和Ⅱ组间则无显著差异(P>0.05)。治疗组Ⅰ和Ⅱ组小鼠的Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Col-Ⅲ)及TGF-β的mRNA水平均低于感染组。细胞内因子染色结果显示:法舒地尔治疗组Ⅰ和Ⅱ组的IL-17~+CD4~+T细胞比例也均显著低于感染组(均P<0.05),而感染组和治疗组的Treg含量则无显著性差异(P>0.05),但治疗组的Treg含量均高于感染组。结论:Rho激酶抑制剂对日本血吸虫感染小鼠肝纤维化的形成有一定的抑制作用。更多还原