Bnk蛋白可作为鸡NK细胞的表面标记

【作者】 韩凌霞； 王兴童； 尹蕾； 吴少莲； 王丽廷； 杨超； 孟兴； 佟相慧； 陈洪岩；

【机构】 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所；

【摘要】 研究背景:自然杀伤(NK)细胞具有先天杀伤病毒感染细胞和转化细胞的功能,在未经抗原刺激的情况下能强表达IFN-γ,但目前鸡NK细胞的表面标记尚未鉴定,主要以来自14日龄鸡胚脾细胞经rIL-2刺激后的MHCI+CD3-混合细胞作为鸡NK细胞。C-型凝集素样受体蛋白BNK具有与小鼠和人NK细胞受体相类似的结构,可能是鸡NK细胞的表面标记。研究目的:鉴定鸡BNK蛋白能否作为鸡NK细胞的表面标记。方法:以原核表达的鸡BNK蛋白为免疫原制备获得2株特异性单抗3C10和1F12。将14日龄鸡胚脾细胞经rIL-2刺激48 h后,利用流式细胞术分选细胞,结果CD3、3C10和1F12阳性细胞的比例分别为2.22±1.31%、46.48±6.23%和38.34±9.16%;利用乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒检测,检测3C10和1F12分选细胞对小鼠NK细胞靶细胞yac-1的特异性杀伤(效靶比为20:1),特异性杀伤率分别为42.2%和37.8%;利用实时荧光定量PCR探针法比较MHCⅠ类分子重链、3C10和1F12阳性细胞表达IFN-γmRNA的水平,结果表明每百万个细胞中,IFN-rmRNA的拷贝数分别为3.94、2549.52和2650.34个。结论:在目前公认的鸡NK细胞制备来源的14日龄鸡胚脾细胞中,含有大量表面表达BNK蛋白的细胞,这些细胞能特异性杀伤小鼠NK细胞靶细胞yac-1,天然大量表达IFN-r,符合NK细胞的生物学特征,表明BNK蛋白可以作为鸡NK细胞的表面标记。更多还原