特异性识别胞内NY-ESO-1抗原的抗体

【作者】 吕丽慧； 夏振坤； 古明珠； 刘莹； 梁猛； 韩慧平； 杨菲菲； 袁运长； 高斌；

【机构】 天津天锐生物科技有限公司； 中南大学湘雅二医院；

【摘要】 NY-ESO-1最初是由Chen等从食道癌的cDNA表达文库中发现的一种具有很强免疫原性的抗原蛋白,此蛋白在多种恶性肿瘤中均有表达,但在正常组织几乎不表达。NY-ESO-1(157-165,氨基酸序列为SLLMWITQC)是HLA-A2限制型优势表位,简写为HLA-A2/SIL。识别这种复合物的TCR通常亲和力较低,但经过分子进化技术提高其亲和力后可特异性靶向肿瘤,用这种高亲和力TCR武装的T细胞已进如临床II期试验为了解决TCR亲和力低,需两个亚基的劣势,我们尝试筛选出可特异性识别MHC复合物所表达的细胞内靶点的抗体分子,称作MHC Antigen Receptor,简称MAR。MAR的技术优势在于可以用较为简便的抗体技术,取代目前世界上主流的细胞内靶点所识别的TCR技术,并且具有更高的特异性和亲和力。我们通过噬菌体展示筛选得到一种可特异性识别HLA-A2/SIL的抗体-MAR SLL,EIISA验证该抗体特异性识别HLA-A2/SLL,而不识别其他多肽和HLA-A2复合物。利用等离子共振技术测定该抗体与HLA-A2/SLL的相互作用及亲和力常数。不相关抗原HLA-A2/a作为参比抗原,HLA-A2/SLL作为实验抗原,参比抗原用来检测背景结合情况。实验结果表明,该抗体与HLA-A2/SIL发生特异性结合,亲和力常数6.25E-08(M),与参比抗原无交叉反应,不结合。T2细胞加载NY-ESO-1/157-165后,利用流式细胞检测技术检测该抗体对HLA-A2/SLL的特异性识别。结果显示,该抗体能特异性识别T2细胞表面的HLA-A2/SLL抗原。同样,FACS可检测到该抗体可以识别既表达HLA-A2又表达NY-ESO-1抗原的骨髓瘤细胞系U266。用MAR SLL武装T细胞后,与U266孵育培养后检测IFN-g的释放。结果显示U266细胞表面的抗原HLA-A2/SIL的刺激,可使MAR SLL-T细胞释放较强的细胞因子,并可杀伤L266细胞。免疫组织切片染色用该抗体对食道癌病人组织切片染色,发现均有不同程度的阳性结果。其中NO.6、NO.9呈强阳性结果。证明该抗体能识别食道癌肿瘤细胞表面的HLA-A2/SIL。综上所述,抗体MAR SLL能特异性识别以MHC复合物的形式,来自肿瘤细胞内部的NY-ESO-1。可望用于治疗表达NY-ESO-1的恶性肿瘤。更多还原