乳腺癌微环境成纤维细胞IL-13/p-IKKβ/NFκB信号通路的研究

【作者】 石小玉； 吴红； 刘赛； 李文林；

【机构】 南昌大学基础医学院；

【摘要】 研究背景:乳腺癌发病原因和机制较为复杂,需深入研究。目的:为IL-13对乳腺癌基质作用的机制研究提供实验和理论依据。方法:①细胞共培养:人乳腺癌细胞株MDA-MB-231与人皮肤成纤维细胞株CCC-ESF-1(ESF)共培养;②Western blotting:收集培养的细胞,聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳,一抗和二抗孵育,ECL显色。③细胞增殖实验(CCK-8法):细胞培养板滴加CCK-8,测OD值(450nm)。④建立人乳腺癌荷瘤裸鼠移植瘤模型:MDAMB-231细胞植入6-7周的雌性裸鼠右侧乳腺内,当肿瘤长径为7 mm左右时,实验组肿瘤组织内多点注射IL-13。⑤免疫荧光实验:荷瘤裸鼠肿瘤组织切片,加一抗和荧光二抗,激光共聚焦显微镜下观察。⑥免疫组织化学实验:荷瘤裸鼠肿瘤组织切片,加一抗和二抗,DAB显色,显微镜观察。⑦统计学分析:实验结果用mean±SD表示,两组间均数比较采用t检验。结果:①IL-13诱导共培养的ESF细胞IKKβ磷酸化。②IL-13诱导的IKKβ磷酸化可作用下游因子NFκBp65和NFκBp50且上调共培养的ESF细胞的NFκBp65和NFκBp50表达。③IL-13协同成纤维细胞促进了乳腺癌细胞的增殖:共培养的微环境和IL-13协同促进了MDA-MB-231细胞的增殖。④IL-13上调人乳腺癌荷瘤裸鼠移植瘤组织IKKβ磷酸化:IL-13干预可上调ESF+MDA-MB-231细胞共生长的裸鼠移植瘤组织IKKβ磷酸化,表明肿瘤基质微环境对IL-13作用的产生具有重要作用。⑤IL-13上调人乳腺癌荷瘤裸鼠移植瘤组织NFκBp65和NFκBp50表达:IL-13干预诱导的磷酸化IKKβ可靶向下游因子NFκBp65和NFκBp50且上调其表达,显示IL-13产生的作用与肿瘤基质微环境有密切关系。⑥人乳腺癌组织表达IL-13、p-IKKβ、NFκBp65和NFκBp50。结论:①IL-13上调与人乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞的p-IKKβ、NFκBp65和NFκBp50的表达。②IL-13上调人乳腺癌荷瘤裸鼠移植瘤组织p-IKKβ、NFκBp65和NFκBp50的表达。③IL-13协同成纤维细胞促进乳腺癌细胞的增殖。④IL-13、p-IKKβ、NFκBp65和NFκBp50在临床人乳腺癌组织中呈现高表达。更多还原