大黄牡丹汤通过调节肠道菌群和Th17/Treg细胞治疗炎症性肠病

【作者】 罗霞； 周联； 温如燕； 罗爽； 郑永艳；

【机构】 广州中医药大学； 广西中医药大学；

【摘要】 目的:探究大黄牡丹汤能否通过改善肠道菌群紊乱,提高SCFAs含量,调节Th17/Treg细胞比例,影响IL-10、TGF-β、TNF-α、IL-l7A等细胞因子的分泌,调节机体微环境,缓解或治疗炎症性肠病(IBD)。方法:采用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导IBD模型,设正常对照组、IBD模型组、美沙拉嗪组和大黄牡丹汤低、中、高剂量组。通过HPLC绘制大黄牡丹汤的指纹图谱,控制汤剂质量,诱导模型同时灌胃给予美沙拉嗪和大黄牡丹汤14天,正常组和模型组给予等体积无菌水;通过观察小鼠一般状况、结肠长度、病理学评分、髓过氧化物酶(MPO)活性、IL-1β含量、外周血中性粒细胞数量及比例,探究大黄牡丹汤对IBD小鼠的治疗作用,同时通过16Sr DNA测序法检测小鼠肠道菌群数量及丰度;气质联用法检测小鼠盲肠内容物中SCFAs;流式细胞术检测小鼠脾脏、肠系膜淋巴结中Th17和Treg细胞数量及比例;免疫组化法检测IL-17A和Foxp3在小鼠结肠中的表达;流式细胞术检测小鼠血清及结肠中IL-6、IL-17A、IL-22、TNF-α、IFN-γ、IL-10含量;ELISA检测小鼠血清及结肠中TGF-β含量。结果:大黄牡丹汤各剂量(含生药量分别为0.25、0.5、1.0g/m L)均能降低小鼠DAI评分,改善小鼠结肠炎症状态,降低结肠MPO活性、血清和结肠IL-1β含量,减少外周血中性粒细胞数量及比例(p<0.01);16S r DNA测序法结果显示,大黄牡丹汤可提高放线菌门和厚壁菌门细菌相对丰度,降低变形菌门和拟杆菌门细菌的丰度,提高肠道菌群的多样性;气质联用技术发现大黄牡丹汤各剂量组乙酸、丙酸的含量均明显高于模型组(p<0.05或p<0.01)。大黄牡丹汤能逆转模型组Th17和Treg细胞比例,降低小鼠IFN-γ、IL-6、IL-17A、IL-22、IL-10等的细胞因子含量(p<0.01)。大黄牡丹汤各剂量均能减少IL-21的分泌,剂量依赖性地促进TGF-β的分泌(p<0.01)。结论:牡丹汤能改善DSS诱导的IBD小鼠的炎症状态,调节并在一定程度上恢复肠道菌群多样性及部分肠道细菌的丰度;调节并恢复Th17/Treg细胞比例及其相关细胞因子分泌水平。大黄牡丹汤对IBD的治疗作用机制可能跟其改善炎症,调节肠道菌群、Th17/Treg细胞比例及相关细胞因子水平有关。更多还原