应用shotgun技术分析旋毛虫成虫排泄分泌蛋白的组分

【作者】 杨小迪； 陶志勇； 程洋； 吴琦； 王小莉； 常雪莲； 张慧； 陈兴智； 方强；

【机构】 蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室； 江南大学无锡医学院病原感染与免疫组；

【摘要】 目的:通过shotgun技术分析旋毛虫成虫排泄分泌蛋白(adult worm excretory/secretory protein,AwESP)的组分,寻找具有免疫调节功能的活性成分。方法:利用收集的旋毛虫成虫制备成虫期的AESP,SDS-PAGE分离酶解后,采用shotgun液相色谱串联质谱系统鉴定,将分析所得的数据应用软件及数据库搜索完成蛋白质的鉴定,并对鉴定出的蛋白质从细胞组分、分子功能、生物学途径三个方面进行Gene Ontology(GO)分类。结果:SDS-PAGE分离的Aw ESP分子量范围在15 000-116 000之间,从中共鉴定出280个蛋白,其中96个蛋白质为已明确鉴定的,假定的蛋白为98个,未鉴定的蛋白为86种。已初步明确鉴定的蛋白中至少有4种可能具有免疫调节作用,包括半胱氨酸蛋白酶抑制剂、丝氨酸蛋白酶、53k Da排泄/分泌抗原、谷胱氨肽转移酶。GO工具分析显示已明确的蛋白具有104种分子功能,参与了365种生物过程。结论:旋毛虫Aw ESP成分复杂多样,有多种蛋白质和多肽未被鉴定,从已明确的蛋白质中初步筛选出4种与免疫调节相关的蛋白。更多还原