GNRs-PEI/siIDO-Man靶向DC导入系统的创建

【作者】 付佳敏； 张瑜娟； 彭珊珊； 王红梅； 袁铿； 闵卫平；

【机构】 南昌大学免疫与生物治疗研究所； 南昌大学基础医学院免疫教研室；

【摘要】 目的:研究发现,肿瘤细胞、树突状细胞(Dendritic Cell,DC)等能产生一种重要的免疫负调控分子——吲哚胺2,3-双加氧酶(Indoleamine 2,3-deoxygenase,IDO),它可以使肿瘤逃避免疫系统的监控,改变肿瘤的侵袭和转移,能力影响DC疫苗临床治疗的效果,本研究应用纳米技术构建能靶向沉默DC中的IDO基因的新型金纳米棒(Goldnanorods,GNRs)导入系统GNRs-PEI-Man,探讨其对DC的靶向沉默效应。方法:体外培养C57/BL6小鼠骨髓来源DC,细胞流式术确定DC表型。用种子溶液生长法合成GNRs,并完成D-甘露糖(Mannose,Man)的功能化修饰及效应分子IDO siRNA的装载,用紫外分光光度计、粒度分析仪、透射电镜以及核磁共振技术对其进行表征检测,凝胶阻滞实验确定siRNA载药量,并检测其对DC细胞毒性试验。将GNRs-PEI/si Cy3-Man尾静脉注射C57/BL6小鼠,24小时后,取小鼠心、肝、脾、肺、肾、引流淋巴结制成冰冻切片,检测靶向效应。流式技术检测GNRs-PEI/si IDO-Man对DC细胞体外转染效率,实时定量PCR及Western blot检测对靶基因IDO沉默效果。结果:功能化修饰后GNRs-PEI/IDO-Man的金纳米棒的紫外-可见吸收光谱的吸收峰发生明显的红移至810nm,透射电镜下观察到修饰前后粒子大小、分散度均没有发生明显改变,核磁共振结果表明D-甘露糖被修饰到金纳米棒表面。修饰后的金纳米棒GNRs-PEI-Man的DC细胞毒性明显下降,生物相容性、生物安全性好。凝胶阻滞实验表明金纳米棒与siRNA的质量比在1.5:1时,修饰后的金纳米棒刚好结合全部siRNA。冰冻切片结果示,GNRs-PEI/si Cy3-Man主要分布在脾脏内。细胞流式结果显示GNRs-PEI/si IDO-Man能转染79%的DC细胞。q-PCR及WB结果表明GNRs-PEI/si IDO-Man的基因沉默效果达到86%。结论:GNRs-PEI/si IDO-Man靶向导入系统选择性的阻断DC内IDO的表达,可用于制备新型DC疫苗。更多还原