泰妙菌素完全抗原的制备与鉴定

【作者】 赵军； 周景明； 聂守一； 耿玥； 马文利； 祁艳华； 张改平；

【机构】 郑州大学；

【摘要】 背景:泰妙菌素(Tiamulin,TML)是一种截短侧耳素类动物专用抗生素,作为兽药和饲料添加剂被广泛应用。目前用于检测TML残留的方法主要是理化检测方法,存在样品处理过程繁琐,需要昂贵的仪器等缺点。目的:为了获得抗泰妙菌素的单克隆抗体,需要用泰妙菌素作为抗原免疫动物,而泰妙菌素作为一种小分子半抗原不能引发免疫反应,它只能与大分子载体蛋白偶联后才能够刺激动物产生免疫反应,因此合成具有强免疫原性的泰妙菌素人工抗原是获得抗TML的单克隆抗体的关键。方法及结果:本研究根据TML的分子结构特点使用三种方法成功制备完全抗原并作免疫效果的评价。1.完全抗原的制备与鉴定本研究分别用碳二亚胺法、混合酸酐法、N,N-羰基二咪唑法将半抗原泰妙菌素偶联至载体牛血清白蛋白(BSA),制备了免疫原TML-E-BSA、TML-M-BSA、TML-C-BSA。同时将半抗原泰妙菌素偶联至载体卵清白蛋白(OVA),制备了包被原TML-E-OVA、TML-M-OVA、TML-C-OVA;对三种方法制备的免疫原做紫外扫描鉴定和SDS-PAGE凝胶电泳鉴定,根据SDS-PAGE凝胶电泳图估算出完全抗原的偶连比。结果均显示抗原偶连成功,估算出偶连比分别为1:25.0、1:23.6和1:8.1。2.完全抗原免疫效果评价分别用完全抗原TML-E-BSA、TML-M-BSA、TML-C-BSA免疫6-8周龄雌性BALB/c小鼠,12只小鼠共分为6组,每种抗原设置20μg、50μg两个免疫量组,免疫间隔2周,共免疫4次;用间接ELISA测定小鼠血清抗体效价,用间接竞争ELISA测定血清抗体敏感性。效价结果显示6组小鼠的血清抗体效价均达到1:3200,各完全抗原高免疫剂量组效价略高于低免疫剂量组,抗原TML-M-BSA免疫小鼠的血清抗体效价略高于其他两组,其中高免疫剂量组达到1:6400;敏感性测定结果显示6组小鼠的血清抗体效价均能被TML标准品抑制,各完全抗原低免疫剂量组敏感性优于高免疫剂量组,其中TML-C-BSA低免疫剂量组2号小鼠血清敏感性最好,IC50为577ng/ml。结论:综上所述,本实验成功合成了人工抗原TML-BSA和TML-OVA,为制备出具有高亲和力和高特异性的抗TML单克隆抗体打下了基础。更多还原