茄子褐纹病菌的分子生物学鉴定研究

【作者】 李涛； 李植良； 黎振兴； 衡周； 宫超；

【机构】 广东省农业科学院蔬菜研究所广东省蔬菜新技术研究重点实验室；

【摘要】 茄子褐纹病是由半知菌亚门球壳孢目拟茎点霉属褐纹病菌[Phomopsis vexan(Sacc and Syd)Harters]侵染引起的重要病害。该病可导致干枝、叶斑和果腐等症状,在全球茄子产区传播,造成严重的经济损失。目前国际上关于褐纹病的研究较少,对其病原菌的分子检测技术较为缺乏。本研究中从广东省各地分离出10个褐纹病疑似菌株,通过提取其菌丝DNA,对褐纹病菌内的3种保守基因序列进行PCR扩增,连接T载体并进行克隆测序,其中包括了核糖体DNA内转录间隔区间(nrDNA ITS)序列,翻译延伸因子1-α基因(TEF1)序列,β-微管蛋白基因(TUB)序列。本研究结果基于ITS、TEF1、TUB序列分析方法,能够对褐纹病菌进行准确的分子鉴定,从而为褐纹病的种类鉴定、种间亲缘关系及病原鉴定分析提供分子生物学理论依据。本研究中利用引物ITS1/ITS4对10个菌株进行扩增,均可获得550 bp大小的扩增条带,测序结果经NCBI比对分析,发现所获疑似菌株均为褐纹病菌株。利用引物EF1-728F/EF1-986R扩增出360 bp条带,剔除测序重复序列,获得3个(E4、E21和E22)TEF1序列在NCBI中进行Blast,由于褐纹病的TEF1区域序列在NCBI数据库中还没有收录,与E4序列相似性最高是间座壳属(Diaporthe)中的Diaporthe convolvuli(KC343780.1),E21和E22相似性最高的序列是间座壳属(Diaporthe)中的Diaporthe miriciae(KJ197246.1),通过BioEdit软件比对分析,E4与Diaporthe convolvuli的相似性为94.9%,E21和E22与Diaporthe miriciae的相似性为95%。利用引物PV-T1/PV-BT-2B扩增TUB序列长度为721 bp,获得3个(T12-1、T1-8和T1-10)TUB序列在NCBI中进行Blast,由于褐纹病的TUB区域序列在NCBI数据库中还没有收录,其中与T12-1相似性最高的序列是拟茎点霉属(Phomopsis)中的Phomopsis cuppatea(HQ586929.1),与T1-8相似性最高的序列是间座壳属(Diaporthe)中的Diaporthe miriciae(KJ197262.1),与T1-10相似性最高的序列是间座壳属(Diaporthe)中的Diaporthe convolvuli(KC344022.1)。通过BioEdit软件比对分析,T12-1与Phomopsis cuppatea的相似性为96%,序列T1-8与Diaporthe miriciae的相似性为95%,序列T1-10与Diaporthe convolvuli的相似性为96.1%。更多还原