水稻丙氨酸氨基转移酶基因特异性抗体的制备及其功能验证

【作者】 柴建芳； 马秀英； 赵和； 吕孟雨； 周硕； 刘永伟； 董福双； 杨帆； 王海波；

【机构】 河北省农林科学院遗传生理研究所河北省植物转基因中心；

【摘要】 为提高小麦的氮素利用率,在我们的前期工作中把小麦Antiquitin基因启动子驱动的水稻丙氨酸氨基转移酶基因转入了小麦品种科农199中,并获得了低氮条件下表现氮高效的3个纯合转基因株系,为进一步检测目的基因在不同组织器官的表达量,需要利用目的基因的特异检测抗体,而目前没有针对该基因的特异检测抗体,因此,有必要制备针对该基因的特异检测抗体。根据水稻丙氨酸氨基转移酶基因的蛋白序列设计了3种抗源序列,分别为ASREGYPANA(131-140)、KGYYGESGKRG(300-310)和NPPKAGDAS(349-357),3种抗原序列经化学合成并偶联后对小鼠进行了免疫,发现其中的2种抗原ASREGYPANA(131-140)和KGYYGESGKRG(300-310)产生了抗体,为进一步验证2种抗体的特异性,分别用它们与转该基因的和未转该基因的小麦株系的根系和叶片进行了Western blot杂交,转基因株系均有很强的杂交信号,而非转基因的对照杂交信号都很弱,其中与抗原ASREGYPANA对应的抗体还有一些非特异性杂交条带,而与抗原KGYYGESGKRG对应的抗体没有其它的非特异性杂交条带产生,可做为检测该基因表达量的理想抗体,该研究为转该基因小麦后代中该基因在不同组织器官的表达量奠定了基础。更多还原