发现一株同时产OXA-58和NDM-1型碳青霉烯酶Acinetobacter pittii

【作者】 杨青； 周孜洋； 陈晓； 陈鸿超； 华永川； 孔海深；

【机构】 浙江大学医学院附属一院检验科；

【摘要】 目的:A.pittii AB34分离自2014年1月本院急诊监护病房56岁慢性阻塞性肺病男性患者的肺泡灌洗液,体外药敏提示对亚胺培南耐药。本文目的研究Acinetobacter pittii AB34对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法:采用E-test条法测定A.pittii AB34对常用抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),通过PCR、克隆测序分析其碳青霉烯酶类型,S1-脉冲场凝胶电泳(PFGE)、Southern杂交对碳青霉烯酶基因进行定位,滤膜接合、电转化试验研究碳青霉烯酶在菌株间移动及传播的能力,提取整个细菌基因组测序获得碳青霉烯酶基因的周围片段。结果:A.pittii AB34对包括亚胺培南和美罗培南在内的所有β-内酰胺类抗生素均耐药,对庆大霉素耐药,对阿米卡星中介,对环丙沙星、复方新诺明、妥布霉素、左氧氟沙星、替加环素敏感,PCR扩增OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-143、SIM-1、SPM-1、GIM-1、IMP-1、VIM-1均阴性;OXA-58和NDM-1特异引物扩增分别获约750bp和约300bp片段的PCR产物,测序结果经BLAST与GenBank序列进行对比分析后确定AB34同时携带OXA-58和NDM-1基因。S1-PFGE Southern杂交确认OXA-58和NDM-1基因同时位于一个约300kb的质粒上,质粒接合和电转化试验均未成功,提取基因组DNA测序发现OXA-58上游为ISAba3序列,OXA-58下游是缩短的ISAba3序列。NDM-1基因上游序列为ISAba125,下游序列为bleMBL、trpF、dsbD、cutA1、GroES、UmuC、UmuD、hypothetical protein、site-specific DNA methylase-like、ISAba31-like、Dihydrofolate reductase putative membrane protein、C-5 cytosine-specific DNA methylase family protein、ISAba14-like。结论:发现一株同时产OXA-58和NDM-1型碳青霉烯酶A.pittii,且OXA-58和NDM-1基因均在同一质粒上。更多还原