Wnt1通过上调SRA和NF-kB参与LPS诱导的炎症反应

【作者】 赵文婷； 郑良荣；

【机构】 浙江大学医学院；

【摘要】 研究背景机体受到细菌感染时,细菌释放的LPS(脂多糖)成分可以激发机体的免疫炎症反应。由LPS激发的炎症反应涉及了多种炎症信号通路(包括MAPK,NF-KB等)的激活。在这其中LPS通过结合于细胞膜表面的toll样受体(主要是TLR4)和清道夫受体A类(SRA)激活下游信号分子myd88进而使p65(NF-KB通路主要转录因子)入核增多,p65入核后增强了TNF-α,IL-6,iNOS的转录,使炎症信号进一步扩大。Wnt通路分为1.经典wnt通路2.非经典wnt通路3.钙离子依赖型通路,属于一类生物体内较为保守的信号通路,主要参与了胚胎发育,细胞增殖,癌症发生等。Wnt1分子属于wnt经典通路的一员。Wnt1由细胞合成并分泌到胞外后,通过结合于细胞膜表面的FZD1,LRP5,LRP6所形成的复合物受体激活了细胞质内β-catenin分子,使β-catenin分子入核后促进TCF1/TCF4转录因子激活,增强对相关基因的转录。以往研究发现,在PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)内wnt1通过促进NF-KB激活抑制了细胞凋亡。但是,wnt通路是否也参与了LPS引起的炎症反应还不甚明了。目的关于LPS如何通过调节SRA以及wnt1激活下游NF-kB的机制还不甚明了。本研究旨在探究wnt1在LPS诱导的炎症反应中的作用,并分析wnt1、SRA和NF-kB三者之间的关系。方法 1)对于THP1细胞给予PMA激活使其分化为巨噬细胞后作为所有后续实验用的细胞。用LPS处理后,Western blot检测细胞中Wnt1蛋白含量的变化。2)对THP1细胞转染Wnt1 siRNA,或Wnt1过表达质粒后,用Western blot检测细胞中NF-KB蛋白表达量的变化,用ELISA和WB检测细胞中炎症因子IL-6,TNF-α,iNOS的分泌量。3)将THP1细胞分别转染Wnt1siRNA或Wnt1过表达质粒,检测处理后的细胞中SRA受体和TLR4受体的表达情况。对于Wnt1过表达的THP1细胞而言,给予SRAsiRNA转染后,检测细胞中细胞中的NF-KB蛋白表达量。4)经过LPS处理的THP1细胞转染FZD1siRNA或加入VAX939(β-catenin抑制剂)后,检测SRA受体蛋白表达量。结果 1)对于THP1细胞给予PMA和LPS处理后,细胞中Wnt1蛋白表达上升。2)对THP1细胞转染Wnt1 siRNA,引起NF-kB表达下降和炎症因子IL-6,TNF-α,iNOS的分泌减少;转染Wnt1过表达质粒后,THP1细胞中的NF-kB表达量和炎症因子IL-6,TNF-α,iNOS的分泌量均上升。3)对THP1细胞转染Wnt1 siRNA,引起细胞中SRA受体表达下降;给予Wnt1过表质粒转染后,SRA表达上升。4)在LPS处理之前的THP1细胞先转染FZD1siRNA或加入VAX939(β-catenin抑制剂),SRA受体蛋白表达量较单独LPS处理下降。结论 1.Wnt1蛋白参与了LPS引起的NF-KB激活,炎症因子的分泌。2.Wnt1可以调节SRA受体(介导了LPS引起的NF-KB激活)的表达。3.wnt1与SRA在细胞膜上存在着共定位,Wnt1也可以通过SRA受体激活NF-KB激活。更多还原