氯氮平对MK-801诱导的精神分裂症大鼠模型大脑皮层Wnt/β-catenin通路研究

【作者】 刘寰忠； 任振华； 钟健；

【机构】 安徽省精神卫生中心； 安徽医科大学；

【摘要】 目的探讨氯氮平对MK-801诱导的精神分裂症大鼠模型大脑皮层Wnt/β-catenin通路的影响方法 1.出生后6d的SD仔鼠,腹腔注射0.3mg/kg的MK-801,每天2次,连续注射2周,对照组注射等体积的生理盐水。给药后1周,检测旷场和水迷宫等行为学的变化。2.注射MK-801的SD仔鼠随机分为三组,氯氮平组、氟哌啶醇组和模型组,分别予以氟哌啶醇0.1mg/kg、氯氮平1mg/kg及等体积生理盐水,每天1次,连续注射2周,对照组仔鼠腹腔注射等体积的生理盐水。给药结束后再次检测旷场和水迷宫等行为学的变化。3.大鼠麻醉处死,内灌注多聚甲醛固定,取出脑组织,外固定,对照The Rat Brain脑立体定位图谱,连续冠状切片,免疫组织化学染色,观察脑内NMDAR1、DA、D2R、DARPP-32、5-HT、GABA、GFAP、Svnaptophysin、Bcl-2、IL-1 beta、TNF-alpha Iba1、Caspase-3等染色。4.UPLC检测脑内神经递质,包括DA、NE、5-HT、5-HIAA、Glu、GABA和Glv。5.取大鼠脑组织,采用TRIzol法抽提总mRNA,逆转录为cDNA后,分别采用RT-PCR和real-time PCR法检测组织中TNF-α、GSK-3β、APC、β-catenin的mRNA的表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠体重显著降低。行为学结果显示,与对照组比较,模型组大鼠自发活动显著减少,空间学习记忆能力明显降低,学习速度减慢。免疫组化结果发现:氯氮平治疗能恢复脑内NMDAR1、DA、GFAP等表达,以及部分脑内递质的表达水平;UPLC结果发现:氯氮平能恢复脑内的DA、5-HT、GABA等部分神经递质水平;流式细胞仪及ELISA结果发现:氯氮平能恢复T细胞亚群、免疫球蛋白和TNF-α等的表达水平。与正常对照组比较,模型组大鼠脑组织TNF-αmRNA的表达水平升高,给予氯氮平治疗后,大鼠脑组织TNF-αmRNA的表达水平降低,与对照组相比较无明显变化。但氟哌啶醇治疗组的TNF-αmRNA的表达水平并没有降低。与对照组比较,模型组大鼠脑组织β-catenin mRNA的表达水平升高,而GSK-3β、APC mRNA的表达水平降低,给予氯氮平治疗后,脑组织β-catenin mRNA的表达水平明显降低,同时,GSK-3β、APC mRNA的表达水平则显著升高。氟哌啶醇治疗组与模型组无差别,但与氯氮平组存在差异性。结论在出生早期给予MK-801慢性重复刺激建立的SZ出生早期发育动物模型能够维持稳定的症状,直至青春期或者成年期,并且在神经生化方面得以证实。MK-801可能是通过TNF-o激活β-catenin基因的表达,抑制基因的表达,激活脑内的免疫炎症反应,导致大鼠神经行为学的损害。氯氮平可能是通过负调控β-catenin基因的表达,上调APC和GSK-3β基因的表达,达到抑制脑内炎症免疫反应。更多还原