G6PD缺乏症编码区突变及启动子区甲基化分析

【作者】 吕荣钰； 陈小文； 张民； 陈运生； 刘芙蓉； 李越； 文飞球；

【机构】 深圳市儿童医院血液肿瘤科；

【摘要】 目的通过对G6PD基因全编码区突变扫描和启动子区甲基化分析,了解启动子区甲基化是否对G6PD基因表达产生影响,以此提高G6PD缺乏症的分子诊断水平。方法本研究采用RT-PCR结合基因测序,检测195个样本(男性145人,女性50人)cDNA编码区突变情况。运用Realt ime荧光定量测定样本mRNA表达水平。使用DNA-PCR结合测序方法检测女性杂合或纯合突变类型及鉴定新突变类型。应用重亚硫酸氢盐处理后测序(BSP)和甲基化敏感性高分辨率熔解曲线分析方法(MS-HRM)检测G6PD基因启动子区域甲基化情况。结果 195个样本(G6PD缺乏组130人,正常对照组65人)共检出18种编码区突变类型,以G1376T、G1388A、A95G最常见,含1种国内外尚未报道的错义突变及1种新发现的同义突变。对于G6PD缺乏组,采用G6PD/6PGD法与RT-PCR结合测序法检出率一致,均检出编码区突变。对于G6PD正常组,G6PD/6PGD法漏检28例错义或同义突变,均为女性样本;使用DNA-PCR结合测序证实仅1例错义突变和1例同义突变为纯合型,其余均为杂合型。22个样本(Ct值≤0.5)mRNA表达水平降低,纳入启动子区甲基化分析。结果显示男性样本未发现甲基化,92%的女性样本(46/50)存在甲基化现象,也有个别样本未检测出甲基化。结论 G6PD缺乏症主要以编码区单个碱基点突变为主。G6PD基因启动子区存在甲基化现象,仅见于女性且十分常见,未发现甲基化现象与G6PD酶活性下降相关证据,提示仅与X染色体失活有关。更多还原