氨甲喋呤耐药的肿瘤细胞中非同源末端连接途径与双微体形成的新机制

【作者】 孟祥宁； 齐秀英； 郭焕焕； 蔡梦迪； 傅松滨；

【机构】 哈尔滨医科大学；

【摘要】 目的:基因扩增是基因组不稳定的常见表现形式,与肿瘤的进展、耐药密切相关,其细胞遗传学形式主要分为双微体和均质染色区。本研究分别选取了含有双微体和均质染色区的氨甲喋呤(Methotrexate,MTX)耐药细胞系为研究对象,探讨非同源末端连接(Non-homologous end joining,NHEJ)与基因扩增及耐药形成的分子机制。方法:采用RNAi技术建立稳定干扰DNAPK-cs克隆;Western Blot、免疫荧光方法检测蛋白的表达情况;Real-time PCR、FISH方法检测基因扩增、双微体数目及微核形成情况;MTT法检测细胞增殖及细胞对化疗药物的敏感性。结果:在含双微体的MTX耐药肿瘤细胞中,NHEJ表达增强。干扰或抑制NHEJ核心分子DNAPK-cs后,DHFR拷贝数及双微体数均显著下降;细胞内微核形成及双微体外排明显增加;肿瘤细胞生长抑制;药物敏感性增加。而在含均质染色区的耐药细胞中,抑制NHEJ功能并未影响均质染色区内的基因扩增水平,虽抑制细胞生长,但药物敏感性仅轻微增加。结论:NHEJ促进双微体的形成并维持其稳定存在,抑制其功能可引起DHFR拷贝数减少,进而增加肿瘤细胞的对MTX的药物敏感性。在MTX耐药的肿瘤细胞中,NHEJ功能可能与均质染色区的形成无关。我们的研究也为肿瘤耐药的个体化治疗提供了依据。更多还原