Tet2与K562细胞中γ-globin激活表达之间的关系研究

【作者】 路兆宁； 马晴雯； 曾凡一；

【机构】 上海市儿童医院,上海交通大学附属儿童医院,上海医学遗传研究所； 上海交通大学医学院基础医学院； 卫生部医学胚胎分子生物学重点实验室,上海市胚胎与生殖工程重点实验室；

【摘要】 目的:探讨羟甲基化酶Tet2(member of ten-eleven translocation family)在药物诱导K562细胞中γ-globin激活表达这一过程中发挥的作用以及可能的作用机制。方法:在K562细胞中转染shRNA表达质粒以下调Tet2的表达,同时在培养液中加氯化高铁血红素(Hemin)或5-氮胞苷(5-azacytidine)诱导K562细胞大量表达γ-globin。用氧化亚硫酸氢盐(oxidative bisulfite)将K562细胞基因组DNA处理后,PCR扩增γ-globin gene body上CpG位点相对密集区域,连接到T-vector克隆,测序后统计该区域甲基化和羟甲基化DNA所占的比例。以realtime PCR的方法检测这一过程中相关红系特异性转录因子与Tet2的表达量。结果:在γ-globin激活表达的过程中Tet2本身的表达量无显著性差异,但Tet2下调会抑制抑制药物诱导γ-globin激活的效率。γ-globin gene body上CpG位点的甲基化/羟甲基化修饰率几乎为0。关键红系转录因子GATA1和NFE4都随着Tet2的下调而下调,KLF1随着Tet2的下调反而有所上调。结论:Tet2在K562细胞γ-globin激活表达的过程中发挥作用,且相比其直接催化γ-globin DNA羟甲基化的功能而言,其作用的途径更有可能是调节转录因子的表达或与DNA的结合。更多还原