禽内源性反转录病毒ALVE表观遗传学分析方法建立及应用

【作者】 朱文奇； 胡序明； 陈世豪； 耿拓宇； 宋成义； 高波； 王宵燕； 崔恒宓；

【机构】 扬州大学动物科学与技术学院；

【摘要】 根据NCBI公布的禽内源性反转录病毒A工,VE1序列设计引物,以SPF鸡胚制备的成纤维细胞为生物材料,建立了ALVE基因序列分析、甲基化水平和转录表达检测方法。以鸡胚成纤维细胞CEF和巨噬细胞系(HD1 1)两种细胞基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得了1912bp的扩增产物,测序后与内源性ALVE1序列比对,核苷酸同源性高达98%以上,说明扩增产物为内源性病毒序列。同时,利用焦磷酸测序分析LTR片段甲基化水平。结果显示:LTR在非免疫细胞CEF中的甲基化水平显著高于巨噬细胞系HD11。最后,利用常规RT-PCR和荧光定量PCR在两种细胞均检测到禽内源性反转录病毒LTR基因、gag基因、pol基因和g11V基因的转录表达。本研究为今后分析禽内源性反转录病毒ALVE功能提供了方法,同时也为深入研究禽内源性反转录病毒ALVE表观遗传学调控机制奠定了基础。更多还原