MiR-483-5p与食管鳞癌基因甲基化关系初探

【作者】 李迎迎； 王丽； 袁园园； 常卫东； 王林嵩；

【机构】 河南师范大学生命科学学院；

【摘要】 实验目的:食管癌是人类常见的恶性肿瘤之一。近年来,其发病率呈上升趋势,我国是食管癌的高发区之一,发病率和死亡率均居世界之首,其中食管鳞癌占90%以上,而5年生存率仅为10%。文献报道,食管鳞癌的基因组学中存在与肿瘤相关基因突变,细胞周期依赖性激酶抑制基因(cyclin-dependent kinase inhibitor,CDKA2N)是其中一个基因,这些突变主要为C*G>T*A转换,从而影响这些基因产物与DNA的结合。同样也有文献报道miRNA作为非编码RNA也参与食管癌的发生、发展过程,但是这些miRNA与它们的靶基因以及靶基因的甲基化关系尚未见报道。为此我们从文献报道中具有早期诊断特征的miRNA中挑选出其中之一miR-483-5p,探讨其在食管癌病人术前和术后血清含量的变化、食管癌组织和癌旁组织含量的变化以及其靶基因和产生基因的mRNA表达量及基因甲基化程度。从分子生物学的角度和表观遗传修饰角度探讨它们的相互关系,以进一步了解食管癌的发病机理。实验方法:分别获取16例食管癌病人的术前、术后血清及癌旁与癌组织,所有病人均经术后病理学鉴定为食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)。同时取正常人9例血清作为正常对照。分别提取miRNA、mRNA和基因组DNA后,利用qPCR、RT-PCR、甲基化特异性PCR法(MSP)等方法检测其miR-483-5p含量以及胰岛素样生长因子Ⅱ(Insulin-like growth factor II,IGF2)、CDKA2NmRNA表达量及基因组DNA甲基化。实验结果表明:14例ESCC病人术前血清miR-483-5p均高于正常人,14例ESCC术后miR-483-5p含量低于术前,12例癌组织的miR-483-5p含量低于癌旁组织,IGF2 mRNA表达量高于癌旁组织,CDKA2N甲基化程度癌组织高于癌旁组织,IGF2甲基化程度则癌组织低于癌旁组织。结论:miR-483-5p是由IGF2内含子2的保守序列编码的,IGF2作为一种生长因子在胚胎发育和肿瘤发生中起重要作用。ESCC时,IGF2的甲基化减弱使IGF2表达增强,而CDKA2N甲基化使CDKA2N表达减弱,从而有利于ESCC的发展。手术切除癌组织使血清miR-483-5p失去来源,从而导致术后血清miR-483-5p含量下降。由此可见,血清miR-483-5p在ESCC病人主要来源于癌组织,因此miR-483-5p不仅可以作为ESCC早期诊断的生物指标,也可以作为术后ESCC病人愈后指标。更多还原