含有新城疫病毒M、F、HN基因病毒样颗粒的构建及表达

【作者】 钱晶； 丛彦龙； 袁乾亮； 薛聪； 尹仁福； 王珂； 张平仄； 丁壮；

【机构】 吉林大学动物医学学院；

【摘要】 新城疫是由新城疫病毒引起的以感染禽类为主的一种急性、高度接触性、致死性传染病。利用昆虫杆状病毒表达系统表达新城疫病毒主要结构基因,可组装成结构空心化的蛋白颗粒,即新城疫病毒样颗粒,该类颗粒与完整病毒的免疫原性相似,无复制和感染能力,具有理想疫苗及其载体的诸多优势。本研究以当前流行的基因Ⅶ型新城疫病毒NA-1株为研究对象,分别扩增其M、F、HN基因,以M+F和M+HN组合形式连接至pFastBac Dual转移载体中,利用Bac-to-Bac系统,将目的片段分别重组至野生杆状病毒上,最终构建了共表达的重组杆状病毒rBV-M+F和rBV-M+HN。进一步对提取的第3代重组杆状病毒基因组DNA,经PCR鉴定结果均与预期结果相符;同时对感染Sf9细胞和细胞培养上清进行Western blotting检测,结果显示在rBV-M+F感染的细胞培养上清可见约40kDa和60kDa条带,而感染细胞沉淀中仅有约60kDa条带;另一组rBV-M+HN感染的细胞培养上清可见约40kDa和70kDa条带,感染细胞沉淀中仅有约70kDa条带,蛋白大小与预期结果一致。已有研究表明,单独表达新城疫病毒M基因即可形成病毒样颗粒,说明M蛋白是形成新城疫病毒样颗粒的主要驱动力。F和HN蛋白作为新城疫病毒的主要糖蛋白,对其毒力起到关键作用。实验结果表明,M与F蛋白或HN蛋白的组合均可分泌到细胞培养上清中,说明以M蛋白为骨架新城疫病毒样颗粒会以出芽形式释放到Sf9细胞外,这可能与新城疫病毒感染细胞后的出芽形式相似。因此,本实验构建两种不同组合的新城疫病毒样颗粒(即M+F和M+HN),进而研究含有不同糖蛋白的病毒样颗粒对宿主免疫应答的影响,试图探讨F蛋白和HN蛋白在细胞水平上的生物学活性及其之间的潜在联系,同时也为新型新城疫疫苗的研制提供新策略。更多还原