羊巴贝斯虫TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立

【作者】 刘爱红； 关贵全； 刘军龙； 谢俊仁； 李有全； 殷宏； 罗建勋；

【机构】 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃省动物寄生虫病重点实验室；

【摘要】 羊巴贝斯虫病(Ovine babesiosis)是一种经蜱传播的血液原虫病,由绵羊巴贝斯虫、莫氏巴贝斯虫、粗糙巴贝斯虫和巴贝斯虫未定种等引起。使感染动物出现发热、黄疸、贫血、血红蛋白尿,甚至死亡。我国已分离鉴定并命名的感染羊的巴贝斯虫有两个种,即莫氏巴贝斯虫和新疆巴贝斯虫未定种。该病在世界各地广泛流行,在我国许多地区也时有发生,尤其是在某些牧区,严重阻碍了畜牧业的发展。为了快速检测羊巴贝斯虫病病原,作者自GenBank下载的梨形虫核糖体18S rRNA基因为靶基因,设计了羊巴贝斯虫的特异性引物和探针,建立了能检测我国流行的两种感染羊的巴贝斯虫的TaqMan实时荧光定量PCR方法。通过对反应条件的优化,结果显示:该方法特异性好,对感染羊的吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫、绵羊无浆体、干净羊基因组和灭菌水均无交叉反应;取不同稀释浓度1.0×10~9-1.0×10~0拷贝/μL的质粒标准品进行灵敏度试验,实时荧光定量PCR方法最低检出限为10~0拷贝/μL,同时每个浓度进行三个平行样品,且每个浓度平行样品之间的Ct值差异甚小,说明该方法的敏感性与重复性均较好。可用于绵羊、山羊和传播媒介蜱体内羊巴贝斯虫的快速定量检测。更多还原