4种樱桃病毒多重RT-PCR检测方法研究

【作者】 卢美光； 高蕊； 李世访；

【机构】 中国农业科学院植物保护研究所；

【摘要】 由于栽培樱桃有较高经济效益,近几年樱桃的栽培在我国各地发展较快。与其他果树一样,病毒病是影响樱桃产量和品质的重要因素之一。我国已报道的侵染樱桃的主要病毒有:李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV),李矮缩病毒(Prune dwarf virus,PDV),樱桃病毒A(Cherry virus A,CVA),樱桃绿环斑驳病毒(Cherry green ring mottle virus,CGRMV),樱桃小果病毒-2(Little cherry virus-2,LChV-2),樱桃小果病毒-1(Little cherry virus-1,LChV-1),苹果褪绿叶斑病毒(Appie chlorotic leafspot virus,ACLSV)等。对我国山东,辽宁和北京樱桃园的样品病毒进行了常规的RT-PCR检测,结果表明CVA与CGRMV,CGRMV与LChV-1,CVA与ACLSV,CGRMV,LChV-1存在复合侵染现象。为了建立一套快速、简便、经济的樱桃病毒检测方法,我们以CVA,CGRMV,LChV-1,ACLSV四种病毒复合侵染的樱桃田间样品为材料,对这4种病毒的多重RT-PCR检测方法进行了研究。通过对多重PCR检测体系的引物组合,引物浓度配比的筛选,检测体系的优化,建立了能同时检测CVA,ACLSV,CGRMV,LChV-1四种病毒的最佳的引物组合和浓度配比[CVA,ACLSV,CGRMV,LChV-1引物终浓度分别为0.08μmol/L,0.9μmol/L,0.04μmol/L,0.8μmol/L,0.09μmol/L(比例为1:11.25:0.5:10:1.125)];并对多重RT-PCR检测方法的灵敏性和特异性进行了测定,最终建立了能同时检测这4种病毒的多重RT-PCR检测技术。更多还原