【作者】 林鹏； 顾宏杰； 郭松林； 王艺磊； 冯建军；

【Author】 Peng Lin;Hongjie Gu;Songlin Guo;Yilei Wang;Jianjun Feng;Fisheries College,Jimei University,Key Laboratory of Healthy Mariculture for the East China Sea,Ministry of Agricultur;

【机构】 集美大学水产学院农业部东海海水健康养殖重点实验室；

【摘要】 采用双标记时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）同时检测嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）B18和产酸克雷伯氏菌（Klebsiella oxytoca）B12,将抗B18抗体和抗B12抗体包被微孔板,然后加入B18和B12菌株,以Sm³⁺标记的抗B18抗体和Eu³⁺标记的抗B12抗体进行示踪,建立了双抗夹心的TRFIA法同时检测嗜水气单胞菌和产酸克雷伯氏菌。该方法检测B18的检测限为6.0×10⁴ cfu/mL,标准曲线在1.0×10⁴-1.0×10⁷cfu/mL范围内线性良好,板内和板间变异系数分别为5.72%和3.78%,检测B12的检测限为1.0×10⁴ cfu/mL,标准曲线范围1.0×10⁴-1.0×10⁷cfu/mL,板内和板间变异系数分别为6.12%和4.13%。交叉反应表明其具有较高的特异性。将该方法检测了人工感染的日本鳗鲡样品,包括鳃、肾、肠、肝和肌肉组织,阳性检测率为100%。双标记TRFIA法同时检测嗜水气单胞菌和产酸克雷伯氏菌,与常用的荧光抗体法及ELISA法相比,灵敏度高、稳定性好并且操作简单,尤其是通过不同的稀土螯合物进行标记,可以同时检测两种病原菌,具有良好的应用前景,有望在水产养殖业得到推广应用。更多还原

【Abstract】 A method for simultaneous detection of Aeromonas hydrophila B18 and Klebsiella oxytoca B12 by the dual-label time-resolved fluoroimmunoassay(TRFIA) is established.The limit of detection of B18 is 6.0×10~4cfu/mL with a measurement range of 1.0×10~4-1.0×10~7 cfu/mL.The intra-assay and inter-assay standard deviation are 5.72%and 3.78%,respectively.The the limit of detection of B12 is 1.0×10~4 cfu/mL with a measurement range of 1.0×10~4-1.0×10~7 cfu/mL.The intra-assay and inter-assay standard deviation are 6.12%and 4.13%,respectively.Cross reaction shows that it has high specificity.The method is optimized to detect the tissues which include gill,kidney,intestine,liver and muscle from infected Anguilla janponica.The results show 100%of samples are positive.更多还原