缝隙连接蛋白43在苯并[a]芘对小鼠睾丸支持细胞损伤中的保护作用

【作者】 于茂辉； 刁海鹏； 冀晓丽； 刘庆平； 周志俊； 吴庆；

【机构】 复旦大学公共卫生学院公共卫生安全教育部重点实验室；

【摘要】 【目的】研究缝隙连接蛋白43(CX43)在苯并[a]芘(BaP)对小鼠睾丸支持细胞损伤中的保护作用。【材料和方法】取小鼠睾丸支持细胞系TM4,以0.5、10.0μmol/L浓度的BaP染毒培养,于染毒的第4h收集细胞,检测细胞的活力和功能情况,以及CX43的mRNA和蛋白的表达量;进一步通过抑制缝隙连接细胞间通讯(GJIC),观察上述指标变化,并检测了抑制前后的p-MAPK通路蛋白变化情况。【结果】TM4细胞的存活率和增殖率,BaP染毒组与对照组相比差别没有统计学意义,但是支持细胞转运乳酸功能的单羧酸转运体(MC T4)的mRNA表达在染毒组下降,CX43 mRNA表达量明显上升,并且随BaP浓度升高而表达量升高(P<0.05),CX43蛋白的表达量没有明显变化,p-CX43蛋白含量表达降低,与对照组相比其差异有统计学意义(P<0.05)。抑制GJIC后,B(a)P暴露使细胞凋亡上升,Cx43蛋白表达下降。进一步用Proteome ProfilterArray法检测了GJIC抑制前后暴露染毒B(a)P所引起p-MAPK通路蛋白变化的影响。结果显示,GJIC抑制后与未抑制相比,染毒B(a)P使Akt通路上的磷酸化Akt1和Aktpan蛋白下降;ERK通路上的ERK1和ERK2下降。【结论】Cx43的mRNA和磷酸化变化是B(a)P染毒TM4细胞相对敏感的指标;GJIC和Cx43在B(a)P短期暴露睾丸支持细胞时可能起保护效应;GJIC和Cx43变化将影响p-MAPK通路蛋白的变化,最终影响细胞的增殖、凋亡和存活。更多还原