过氧化氢对蛋白磷酸酶2A甲基化及羧基甲基酯酶核质分布的影响

【作者】 唐深； 秦富； 刘银品； 陆彩玲； 曾晓春； 刘雨阳； 李习艺；

【机构】 广西医科大学基础医学院； 广西医科大学公共卫生学院； 广西医科大学第一附属医院；

【摘要】 【目的】蛋白磷酸酶2A（Protein phosphatase 2A,PP2A）是细胞内重要的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,由结构亚基、调节亚基和催化亚基（C亚基）组成,其中C亚基甲基化对PP2A全酶的功能发挥具有重要作用,其去甲基化受羧基甲基酯酶（PME）调控。本研究探讨过氧化氢（H₂O₂）对蛋白磷酸酶2A催化亚基（PP2A-C）甲基化及羧基甲基酯酶（PME）核质分布的影响。【材料和方法】以原代培养的皮肤成纤维细胞HPF及小鼠胚胎成纤维细胞（NIH/3T3细胞）为研究对象,激光共聚焦显微镜扫描检测H₂O₂处理及N-乙酰半胱氨酸和PME抑制剂等对细胞总PP2A-C、去甲基化PP2A-C核质分布的影响;构建与绿色荧光蛋白融合的PME高表达293细胞株（PME-GFP293）,激光共聚焦显微镜扫描动态观察H₂O₂处理对细胞PME核质分布变化。【结果】结果显示H₂O₂诱导细胞内去甲基化PP2Ac表达增加,且核内/胞浆比例分布较空白对照组明显降低;使用NAC拮抗H₂O₂后PME-1和去甲基化PP2Ac的核内/胞浆比例较单纯H₂O₂刺激时有明显提高;使用PME抑制剂拮抗H₂O₂后PME-1和去甲基化PP2Ac的核内/胞浆比例与单纯H₂O₂刺激时相似;总PP2Ac与LCMT的变化在各组间均未有统计学差异。HPF及NIH 3T3细胞结果相似。PME-GFP293细胞株与空质粒转染细胞比较,蛋白免疫印迹显示PME表达明显升高。激光共聚焦扫描结果显示,绿色荧光分布于胞核与胞浆,H₂O₂刺激后,荧光强度核质比逐渐下降。【结论】氧化应激诱导细胞去甲基PP2A-C核质分布异常,可能与氧化应激下PME的核质分布有关。更多还原