小鼠表皮干细胞分子标记的初步筛选

【作者】 陈萌； 周雯； 唐慧； 张静； 范轶欧； 李慧；

【机构】 山东省疾病预防控制中心毒理所；

【摘要】 【目的】用标记滞留细胞(LRCs)以及免疫荧光双标记方法进行小鼠表皮干细胞(ESCs)可靠分子标记的筛选,为进一步分离和研究表皮干细胞提供线索和基础。【材料和方法】选择出生5d的昆明小乳鼠进行腹腔注射5-溴,2-脱氧尿嘧啶(5-bromodeoxyuridine,BrdU),隔日注射,连续7d。于注射后7d、30d、60d、90d杀死小鼠并褪毛,取下老鼠背部皮肤,保存于液氮罐中。将标本制成冰冻切片及石蜡切片。在注射后7d、30d、60d、90d的石蜡切片上进行BrdU染色。选取注射后第90天的冰冻切片,分别进行BrdU与整合素β1、α6、角蛋白K19、P63和CD34的双重免疫荧光标记,观察这些标记物与BrdU的符合度。在荧光显微镜下(200×)随机选取视野,观察每组标本中的随机10个视野并计数其中的阳性细胞数,最后计算出每组标本平均阳性细胞数目及平均阳性细胞百分比。【结果】随着注射BrdU时间的延长,石蜡切片中BrdU阳性细胞数逐渐减少,但减少到90天后就维持在一个相对稳定的数量不再减少。90天后的石蜡切片免疫组化结果显示:有少数阳性细胞存在于小鼠皮肤上皮细胞中,这些阳性细胞主要位于毛囊的隆突部位,皮肤基底层中也有少数阳性细胞散落。免疫荧光双标的结果显示:Brdu与整合素β1双标阳性的细胞占所有整合素β1阳性细胞的81%,占所有Brdu阳性细胞的94%;Brdu与角蛋白K19双标阳性的细胞占所有角蛋白K19阳性细胞的76%,占所有Brdu阳性细胞的82%;Brdu与整合素α6双标阳性的细胞占所有整合素α6阳性细胞的69%,占所有Brdu阳性细胞的77%;Brdu与P63双标阳性的细胞占所有P63阳性细胞的65%,占所有Brdu阳性细胞的80%;Brdu与CD34双标阳性的细胞占所有CD34阳性细胞的30%,占所有Brdu阳性细胞的62%。【结论】整合素β1与BrdU的符合率最高,其次是角蛋白K19,CD34最低。因此整合素β1和角蛋白K19是这些分子标记物中筛选干细胞较好的指标。可以通过整合素β1和角蛋白K19双重标记实现对表皮干细胞的初步筛选。更多还原