活化T细胞核因子在双酚A调控巨噬细胞分泌IL-10中的作用

【作者】 何秀； 郭丽； 段志文； 王晓红； 喻道军； 马明月； 张玉敏； 裴秀丛；

【机构】 沈阳医学院公共卫生学院；

【摘要】 【目的】活化T细胞核因子(NFAT)在免疫反应中对诱导基因转录起重要作用,其最主要的功能是选择性诱导细胞因子和其他免疫调控基因转录,NFATp、NFATc是NFAT基因家族的重要成员,对免疫系统分别起下调和上调作用。本研究旨在探讨NFAT在环境内分泌干扰物双酚A(BPA)调控小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)分泌IL-10蛋白中的作用,为进一步研究BPA的免疫及生殖毒作用机制提供理论依据。【材料和方法】以0.1%DMSO为对照组,BPA(0.1μM、1μM、10μM、100μM及1000μM)作用于RAW264.7细胞24h、48h,用CCK8试剂盒检测细胞活性。以1μg/ml脂多糖(LPS)为激活剂,以1μM、10μM、50μM、100μM BPA作用细胞4h、12h,提取RNA,用实时定量PCR方法测定IL-10、NFATc、NFATp基因表达;作用24h,用ELISA试剂盒检测细胞上清液中的IL-10蛋白含量。【结果】与对照组比较,1000μM BPA无论作用24h还是48h均能明显抑制细胞活性(p<0.01)。与对照组相比,LPS显著促进巨噬细胞分泌IL-10蛋白。50μM、100μM BPA作用细胞24h,与LPS组比较,BPA对IL-10蛋白抑制率为81.0%、78.4%,显著抑制IL-10蛋白的分泌(p<0.01)。与LPS组相比,BPA染毒4h时IL-10基因表达无明显变化,而12h时其mRNA水平随染毒剂量增高而降低,差异有统计学意义(p<0.01)。与LPS组比较,BPA染毒4h能明显促进NFATp mRNA表达,并有剂量反应关系,而染毒12h基因表达变化差异不明显。BPA作用细胞无论4h还是12h NFATc mRNA表达无明显变化。【结论】本实验条件下,BPA对巨噬细胞分泌IL-10蛋白存在一定的抑制作用,这可能是BPA通过促进NFATp基因表达而非NFATc依赖途径,去下调IL-10 mRNA表达,从而使巨噬细胞分泌IL-10蛋白减少。因此,NFATp在BPA调控巨噬细胞分泌IL-10蛋白中具有一定的作用。更多还原