藏药佐太对小鼠肝脏时钟基因的影响

【作者】 李欢； 邱敏； 吴芹； 陆远富； 刘杰；

【机构】 遵义医学院基础药理教育部重点实验室；

【摘要】 【目的】生物钟是生物适应环境周期性变化的一种内在机制,具有重要的生理功能,生物钟的紊乱会严重影响健康或生存。近20年来,在生物钟研究领域学者们做了大量关于生物钟机制,生物钟紊乱与某些疾病的关系的研究。但是,在药物和毒物是否会影响时钟基因节律变化这一方面研究甚少。而其对生物钟基因的影响更是知之甚少。佐太是藏药的最基本组成成分,它含有许多重金属,例如汞等。它在很多珍贵的藏药中起着"母药"的作用。那么佐太是否会影响生物钟的节律呢?在这方面没有研究。所以本实验旨在研究藏药佐太对昆明种小鼠肝脏基因昼夜节律变化的影响。【方法】昆明种小鼠在环境控制的SPF饲养室内适应饲养1周后,随机分为给药组和对照组。给药组按临床给药剂量佐太10mg/kg灌胃给药7天后,于10:00,14:00,18:00,22:00和次日02:00,6:00处死,取小鼠肝脏组织,提取RNA,用实时荧光定量PCR检测24h内时钟基因clock,Bmal1,per1,cry1,Dbp和Nr1d1的昼夜节律变化。Clock和Bmal1作为外周生物钟调控的核心,clock和Bmal1的二聚体是启动生物钟调控的转录因子,它能激活周期基因Per1,Per2和隐花色素基因Cry1和Cry2,其中隐花色素基因存在于大脑的中枢钟时还受环境中光的调控。白蛋白结合基因Dbp和核受体基因Nr1d1是时钟输出基因。【结果】在6:00,10:00时钟基因clock的表达量,佐太组明显低于正常组,但在18:00clock表达量最低点时,佐太组却高于正常组;同样地,时钟基因Bmal1,在6:00和10:00时,佐太组低于正常组。其他时间表达量无变化;对于时钟基因Per1,在18:00和2:00,佐太组表达量高于正常组,但在10:00和22:00,其表达量低于正常组,其他时间两组表达量无差异;时钟基因Cry1,在6:00和10:00,佐太祖表达量明显低于正常组,但在2:00佐太组表达量高于正常组,其他时间两者表达无差异;时钟基因Dbp和Nr1d1,佐太组和正常组表达量趋势大体一致,但在18:00时,Dbp表达量佐太组高于正常组,Nr1d1表达量佐太组却低于正常组。【结论】1.生物钟基因Bmal1,clock,Per1,Cry1,Dbp,Nr1d1的表达在昆明种小鼠肝脏呈典型的昼夜节律。2.在临床给药剂量下,藏药佐太可以影响昆明种小鼠肝脏时辰基因Bmal1,clock,Per1,Cry1,Dbp,Nr1d1的昼夜节律变化,同时,时钟基因昼夜节律的变化对藏药佐太的治疗作用和毒性作用值得进一步研究。更多还原