微囊藻毒素-LR致细胞恶性转化过程中抗氧化防御体系功能的变化

【作者】 农清清； 范誉； 廖娟； 胡新梅； 韦宏旷； 郭尧平； 陆继培；

【机构】 广西医科大学公共卫生学院；

【摘要】 【目的】研究微囊藻毒素-LR(Microcystin-LR,MC-LR)致永生化人肝细胞株WRL-68恶性转化过程中抗氧化防御体系功能的变化。【方法】常规细胞培养,每3天传代一次,细胞始终暴露于10nmol/L的MC-LR。采用软琼脂实验及裸鼠成瘤实验检测未处理的WRL-68细胞及MC-LR处理WRL-68细胞的不同阶段(第10、15及25代)是否发生恶性转化。采用MTT及血清依赖实验检测不同转化阶段细胞的增殖率;采用ELISA法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的活性以及谷胱甘肽(GSH)的含量;采用实时荧光定量PCR法检测γ-GCS的催化亚基(Glutamate cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)和调节亚基(Glutamate cysteine ligase moditier subunit,GCLM)的mRNA表达水平。【结果】第15、25代MC-LR转化细胞的增殖率均高于未处理的WRL-68细胞;第10代MC-LR转化细胞在软琼脂中未形成细胞集落,第15、25代MC-LR转化细胞的软琼脂集落形成率均高于未处理的WRL-68细胞(p<0.05)。用第25代MC-LR转化细胞接种裸鼠,可见皮下有肿瘤形成。与未处理的WRL-68细胞相比,第10、15及25代MC-LR转化细胞的SOD、CAT、GSH-Px、γ-GCS酶活性及GSH含量逐渐降低,第25代降低最为明显(p<0.05);第10、15及25代MC-LR转化细胞的GCLC mRNA表达水平分别降低至未处理细胞的(83.96±3.76)%、(69.32±3.06)%和(66.43±10.25)%,GCLM mRNA表达水平分别降低至未处理细胞的(86.08±7.15)%、(57.67±3.29)%和(53.68±4.23)%,差异均有统计学意义(p<0.05)。【结论】长期低浓度暴露于微囊藻毒素-LR可损伤肝细胞抗氧化防御体系的功能,诱导细胞发生恶性转化。更多还原