MCLR抑制Hep-2细胞中的PP2A活性并对细胞骨架产生影响

【作者】 王蓓蕾； 黄朴； 徐立红；

【机构】 浙江大学医学院生物化学系；

【摘要】 【目的】当今水体富营养化以及由此造成的蓝藻爆发是人类所面临的严峻问题。大量蓝藻在水体中生长时产生大量有毒物质微囊藻毒素,其对许多生物都具有毒性作用。目前认为,微囊藻毒素LR的主要致毒机理是通过抑制蛋白磷酸酶2A的活性从而产生一系列的细胞毒性作用。研究发现蛋白磷酸酶2A的活性对于肿瘤细胞的生长、增殖、粘附、迁移等都具有重要的作用。本实验室前期研究中发现MCLR对正常细胞系（HEK293、HL7702和FL）和肿瘤细胞系（SMMC7721）都产生一定的毒性作用,为进一步探究MCLR在肿瘤细胞中的作用机制,本实验选取了人喉癌细胞Hep-2作为研究对象。【方法】应用流式细胞仪、免疫印迹技术、免疫荧光技术、免疫共沉淀技术以及细胞划痕实验,检测MCLR产生的细胞效应以及对PP2A活性、PP2A底物磷酸化水平的影响。【结果】研究发现,MCLR对Hep-2的细胞周期和凋亡的影响不明显。但MCLR进入Hep-2细胞与PP2A特异性结合后明显抑制了PP2A活性,并且在10μM组活性降低最明显。同时检测到PP2A各亚基表及翻译后修饰水平发生了改变。调节亚基A蛋白表达量略微下降,而催化亚基C表达量有一定程度的升高,同时检测到C亚基Leu³⁰⁹位点的甲基化以及Tyr³⁰⁷位点的磷酸化都发生改变。另外,核心酶AC存在一定程度的解离,同时,C亚基和调节蛋白α4结合也下降。MCLR对PP2A的抑制作用还引起了骨架相关蛋白的改变以及细胞骨架系统的重构。细胞的微丝和微管都发生了明显的改变,还造成了微管相关蛋白Tau和膜细胞骨架连接蛋白Ezrin磷酸化水平的升高。同时,划痕实验表明MCLR能够促进Hep-2细胞的迁移。【结论】MCLR抑制Hep-2细胞PP2A的活性,破坏其细胞骨架并对细胞迁移产生一定的促进作用。因此对全面阐述MCLR在肿瘤细胞中的作用机制提供了一定的帮助。更多还原