广西眼镜蛇蛇毒磷脂酶A₂的分离纯化及其对HSC-T6细胞的作用

【作者】 付道莹； 张学荣； 班建东； 罗小玲； 廖明； 赵勋； 靡农君； 陈缨；

【机构】 广西医科大学；

【摘要】 目的:对广西眼镜蛇毒中磷脂酶A₂进行分离纯化并测定其对肝星状细胞HSC-T6的增值抑制作用。方法:采用Sephadex G-50凝胶层析柱、CM-Sepharose CL-6B离子交换柱、Macro-prep High S预装柱结合的方法分离广西眼镜蛇粗毒,经平板法测定各峰的PLA₂活性;经SDS-PAGE电泳鉴定终产物纯度并测定分子量,经NanoLC-ESI-MS/MS鉴定其组分;CCK-8法测定PLA₂对肝星状细胞（HSC-T6）的增殖抑制作用,找出引起其凋亡的最小毒性浓度。结果:Sephadex G-50凝胶层析柱、CM-Sepharose CL-6B离子交换柱、Macro-prep High S预装柱层析法,得到第Ⅲ峰具PLA₂活性,且达到电泳纯,经NanoLC-ESI-MS/MS鉴定其为PLA₂,分子量约为14.06kd;PLA₂在0¹μg/ml的浓度下对HSC-T6细胞具有一定的促增殖作用,2μg/ml时细胞数达到最大值,4¹6μg/ml时对细胞生长有抑制作用,且随浓度增大细胞数减小。结论:采用G-50、CL-6B、Macro-prep High S预装柱结合的方法对广西眼镜蛇毒进行分离纯化,得到电泳纯且具PLA₂活性的磷脂酶A₂;广西眼镜蛇毒PLA₂对肝星状细胞HSC-T6增殖有抑制作用,PLA₂对HSC-T6细胞的最小毒性浓度为2μg/ml更多还原