RNR2调控的红、绿荧光蛋白发光酵母细胞对化学诱变原筛选的研究

【作者】 李湘鸣； 陆益新； 王瑞鲲； 吴倩倩；

【机构】 扬州大学医学院预防医学教研室；

【摘要】 目的:建立RNR2启动子调控的红、绿荧光蛋白双信号发光酵母细胞高通量筛选化学诱变原。方法:用PCR方法从酵母(W303-1A)基因组扩增RNR2启动子,将其插入到含酵母嗜好遗传密码子的yEGFP报告载体(pRNR2-yEGFP);从YIPlac204TC-NLS-DsRed-Express-2扩增DsRed-Express-2红色荧光蛋白,用构建成酵母报告载体(pGPD-DsRed-Express2)。用醋酸锂方法将其共同转化于W303-1A酵母细胞,从而构建成RNR2启动子调控的红、绿荧光蛋白双信号发光酵母(W303-1A/RNR2-yEGFP/DsRed-Express2)。用不同DNA作用水平诱变原分别作用于该发光酵母细胞,于0,4,8,12,16和20 h,分别测红、绿荧光蛋白的发光强度,用其相对荧光强度描述与诱变原的剂量效应关系。结果:在与DNA发生结合的化合物中,放线菌素D呈阳性而溴乙锭呈阴性;在与DNA发生烷基化的化合物中,甲磺酸甲脂和瘤可宁呈阳性,而丝裂霉素C呈阴性;在使DNA发生断裂的诱变原中,顺铂、4-硝基-N-氧化喹啉、博来霉素和福来霉素均呈阳性;在抑制DNA合成酶或拓扑异构酶的诱变原中,5-氟尿嘧啶、羟基脲和喜树碱均呈阳性;而非基因毒性化合物秋水仙碱、刀豆氨酸和四环素均呈阴性。结论:该重组双信号发光酵母细胞可快速、方便和高通量地筛选诱变原,具有较好的敏感性和特异性。更多还原