抗菌脂肽毒理学安全性研究

【作者】 王丽云； 徐军； 肖竟； 梁婕； 俞萍； 赵荣； 施伟庆； 陆罗定；

【机构】 江苏省疾病预防控制中心毒理所；

【摘要】 目的枯草芽胞杆菌可产生多种抗微生物活性物质,是一类结构新颖的环状肽类化合物,即新型食品添加剂,具有抗菌谱广（革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、真菌）的特点,受试物成人日推荐量100mg,为保障食品安全和消费者使用安全,对抗菌脂肽进行毒理学安全性评价。方法按卫生部《食品安全性毒理学评价程序和方法》（2003）进行。结果急性毒性试验:霍恩氏法。小鼠灌胃后20分钟见及高剂量组出现毛发蓬松、精神萎靡、活动减少、管状尾、抽搐、稀便等中毒症状,雌雄小鼠急性经口LD₅₀值及95%可信限分别为5010（3080⁸140）mg/kg b.wt和7940（4670¹3500）mg/kg b.wt,根据急性毒性(LD₅₀)剂量分级,属实际无毒级。体外哺乳类细胞（V79/HGPRT）基因突变试验:中国仓鼠肺（V79）细胞株,在加与不加S9条件下设120、60、30、15、7.5μg/ml和40、20、10、5、2.5μg/ml各5个试验组,同时设阴性对照组:DMEM培养液和阳性对照组:(-S_{9:甲磺酸乙酯终浓度为0.5μl/ml;+S9苯并芘终浓度为5μg/ml}。与空白对照组的自发突变率相比,阳性对照组细胞突变率均超过3倍以上（P<0.01）;各剂量组的细胞突变率未呈现致基因突变作用。骨髓细胞微核试验:30h两次灌胃法。根据LD₅₀数值,雌雄分别设1/8LD₅₀o、1/4 LD₅₀和1/2 LD₅₀各3个剂量组、1个溶剂对照组（纯净水）和1个阳性对照组（环磷酰胺40mg/kg b.wt.）,雌雄小鼠溶剂对照组具微核细胞率分别为1.8%o-2.0%o,阳性对照组微核细胞率分别为14.2‰-16.0%o,各剂量组微核细胞率分别为2.2%o-2.6%o,未见对小鼠骨髓细胞的致微核作用。小鼠睾丸染色体畸变试验:5天染毒。剂量组设计同雄性骨髓细胞微核试验,阳性对照组（丝裂霉素C 2mg/kg b.wt.）染色体细胞畸变率:溶剂对照组为0.2%,阳性对照组为7%,各剂量组分别为0.2%-0.4%,未见对小鼠睾丸染色体的诱变活性。90天喂养试验:以500.0、333.3和166.7mg/kg b.wt剂量喂养大鼠90d,观察大鼠生长发育,记录摄食量、计算食物利用率,进行血液、生化、大体解剖和组织病理学检查结果显示:各剂量组动物活动、生长正常;大鼠每周体重、增重、摄食量、食物利用率与对照组值相比,无显著性差异（P>0.05）;试验中期和试验结束时,各剂量组红细胞数、血红蛋白、白细胞数和分类、血小板数与对照组比较,无显著性差异（P>0.05）。试验结束时,血液生化学指标（丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、尿素氮、肌酐、总胆固醇、总蛋白、白蛋白、血糖）与对照组比较,无显著性差异（P>0.05）,低、中剂量雄鼠甘油三酯值升高有显著差异（P<0.05,P<0.01）;脑、心、肺、肝、脾、肾、胃、十二指肠、肾上腺、胸腺、睾丸、卵巢大体解剖和组织病理学检查,未见与抗菌脂肽明显有关的组织病理改变,雌雄大鼠实际摄入的最大未观察到有害作用剂量（NOAEL）分别为537.2、445.8mg/kg（分别相当于推荐剂量的321和267倍）结论在本试验条件下,抗菌脂肽属实际无毒级,V79/HGPRT试验、骨髓细胞微核试验和雄性小鼠睾丸染色体试验阴性,90天喂养试验未见抗菌脂肽对受试动物产生明显毒性作用。更多还原