抗VEGF抗体通过调控miR-21抑制肿瘤转移

【作者】 吕明； 杨静； 冯健男； 沈倍奋；

【机构】 军事医学科学院基础医学研究所；

【摘要】 目的 :探讨抗VEGF抗体抑制肿瘤的新作用机制。方法 :借助基因芯片分析抗VEGF抗体治疗前后的肿瘤组织mi RNA表达谱的变化;利用实时定量PCR确定目标mi R-21表达水平;借助低氧培养、特异性抑制剂阻断、si RNA干扰、WB以及流式细胞技术探讨抗VEGF抗体调控mi R-21的分子机制;利用细胞增殖、细胞迁移等实验分析抗VEGF抗体调控mi R-21的生物学效应及靶蛋白。结果 :抗VEGF抗体治疗前后的肿瘤组织mi RNA芯片比对结果显示,靶向VEGF抗体治疗前后肿瘤组织中mi RNA表达谱呈现显著变化。其中,原癌基因mi R-21表达水平的明显下调。进一步的研究显示,HIF-1a诱导的肿瘤细胞自分泌VEGF以及外源性VEGF均能特异性地上调mi R-21表达水平;靶向VEGF抗体可以逆转该效应。借助特异性抗体阻断、si RNA干扰等实验结果提示,VEGF特异性地通过肿瘤细胞表面VEGFR1激活下游信号通路,促进NF-κB磷酸化并入核,上调mi R-21的表达;与VEGFR2等其他VEGF受体无关。VEGF通过调控mi R-21可以促进肿瘤细胞HT-29迁移,而对细胞增殖没有显著的影响。借助Tarbase 6.0数据库分析mi R-21调控靶蛋白,利用DAVID进行聚类分析,共20种mi R-21靶蛋白参与细胞迁移,进一步借助生物学进行验证,提示mi R-21可能通过下调PTEN、APC、TGF-βRIII等抑制肿瘤细胞迁移蛋白的表达水平,进而促进HT-29肿瘤细胞迁移。结论 :VEGF通过调控mi R-21促进肿瘤迁移,特异性抗体阻断可以通过调控mi R21抑制肿瘤转移。更多还原