甘草素对酒精诱导人肝细胞HL-7702和小鼠肝脏损伤的保护作用及其机制的研究

【作者】 谷大为； 陈志敏； 周明； 蔡云清；

【机构】 南京医科大学；

【摘要】 目的研究甘草素(LQ)对酒精诱导的人肝细胞HL-7702和小鼠肝脏损伤的保护作用及其氧化应激机制,为对甘草素的抗氧化研究提供理论依据。方法小鼠随机分为正常对照组、乙醇模型组、甘草素组(10、20、40mg/(kg·d)),灌胃30d,最后一次灌胃16h后,乙醇模型组和各甘草素组均一次性50%乙醇(12ml/kg·bw)灌胃,6h后处死、取血和肝组织。人肝细胞HL-7702分为正常对照组、乙醇模型组、甘草素组(10、20、40μM),处理12h后,200mM酒精处理4h。采用HE染色观察小鼠肝组织,相应试剂盒测定血清及培养液上清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量及肝组织和细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量,线粒体膜电位(MMP)变化,TUNEL法测定小鼠肝细胞凋亡,MTT法分析细胞生存率,Hoechst33258染色和Annexin V-PI双染法观察细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测小鼠和HL-7702细胞凋亡相关蛋白表达。结果 (1)甘草素可以保护酒精性肝损伤并减轻细胞凋亡:与乙醇模型组比较,动物试验中的HE染色显示甘草素组的肝组织水肿和坏死明显减轻;小鼠血清和细胞培养液上清中的ALT、AST水平和肝细胞凋亡明显低于乙醇模型组(p<0.05);(2)甘草素通过改善氧化应激指标、调整凋亡的线粒体通路相关蛋白表达减轻细胞损伤:甘草素处理后小鼠肝组织和HL-7702细胞中SOD、GSH、GSH-Px、线粒体膜电位水平明显高于乙醇模型组(p<0.05),而ROS、MDA水平低于乙醇模型组(p<0.05);小鼠和HL-7702细胞中甘草素组的VDAC(电压依赖性阴离子通道蛋白)、Bcl-2蛋白表达增高(p<0.05),细胞色素C、Caspase-9、Caspase-3、Bax蛋白表达下降(p<0.05)。结论甘草素对酒精诱导的人肝细胞HL-7702和小鼠肝损伤具有保护作用,其机制可能是通过阻止ROS介导的线粒体信号通路,抑制肝细胞凋亡,从而改善酒精性肝损伤。更多还原