播娘蒿内参基因开发

【作者】 许贤； 倪汉文； 王贵启； 刘小民； 李秉华；

【机构】 河北省农林科学院粮油作物研究所；

【摘要】 反转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)是研究植物体内基因功能的重要方法之一,为了得到准确的实验结果,必须选择一个合适的内参基因,该基因需要在不同实验条件和实验材料中具有稳定的表达。播娘蒿对苯磺隆产生了抗药性,目前还没有研究明确播娘蒿对苯磺隆产生抗性是否与靶标基因乙酰乳酸合成酶(ALS)的表达量有关。本研究以南宫、宁晋、博野、徐水等4个抗性种群及大名敏感种群作为实验材料,以ACT8,ACT7,elF4A,UBQ10,UBC,18SrRNA,和EF1-a-3等7个基因作为候选内参基因,采用qRT-PCR技术测定7个候选基因在上述5个播娘蒿种群的苯磺隆不同用药时间处理(0、1、2、3、4、5、6 d)、不同组织器官(根、茎、叶、花和角果)处理及不同生长时期(苗期、生长中期和开花期)处理中的表达量。采用geNorm,NormFinder,和BestKeeper三个统计软件分析了7个候选内参基因在不同实验处理中的Ct值的稳定性,结果表明,ACT7,UBC和18SrRNA在所有的实验处理中表达稳定,UBC和18SrRNA在不同组织器官和不同生长阶段处理中表达稳定。本研究开发了适用于研究播娘蒿基因表达水平变化的内参基因,为研究播娘蒿抗性水平与ALS基因表达量的关系奠定了基础,同时为研究播娘蒿其他基因的功能奠定了基础。更多还原