CFSE荧光负染法检测RAW264.7活细胞摄取超顺磁性氧化铁纳米粒子

【作者】 何向锋； 王建红； 彭春雷； 丁令池； 徐薇微； 宋佳烨； 葛建娟；

【机构】 南通市肿瘤医院；

【摘要】 背景:应用超顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIO)标记细胞后,对其标记率的检测手段单一,目前多通过普鲁士蓝染色方法,其不利之处在于该方法不能用于观察活细胞对SPIO的摄取。目的:探讨荧光探针CFSE荧光负染法用于检测RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞吞噬SPIO的可行性及其荧光特征。方法:体外对RAW264.7细胞进行SPIO的标记,然后分别采用普鲁士蓝染色和CFSE荧光负染法检测RAW264.7细胞对SPIO的摄取情况;用台盼蓝染色法检测CFSE荧光标记细胞的活力;应用共聚焦显微镜进行荧光负染法检测RAW264.7细胞对SPIO的摄取。结果:普鲁士蓝将RAW264.7细胞内吞噬的SPIO标记为醒目的蓝色,核固红将细胞核标记为红色。在荧光负染图像上RAW264.7细胞内吞噬的SPIO表现为荧光负染区,呈筛孔状。CFSE荧光负染法与普鲁士蓝染色法的检测结果具有很好的对应性。RAW264.7细胞经过SPIO和CFSE双重标记后,对细胞活力的影响较小,死细胞比例较低。结论:CFSE可以标记活细胞,不影响细胞增殖。CFSE将全细胞染为绿色,细胞内吞噬有SPIO时,SPIO富集于吞噬体内,阻断了检测光线,使其在荧光图像上表现为荧光负染区,根据负染区的大小和数量可方便判断出细胞对SPIO的吞噬率,而不影响细胞的活性。CFSE荧光负染法同普鲁士蓝染色法用于细胞摄取SPIO的检测各有特点,可以根据研究工作的需要灵活选用,两者的检测结果可相互印证。此外,SPIO可用普鲁士蓝染色检测,其它不含铁元素的纳米或微米粒子则不适用此方法。而SPIO的光学特性为不透光,其他具有相同或相似不透光特性的纳米或微米粒子,均可用CFSE荧光负染法动态检测活细胞对其的摄取与代谢过程,其应用范围更为广泛。更多还原