鸡肉中马杜霉素免疫磁珠净化-酶联免疫检测方法研究

【作者】 肖娟； 薛亚南； 李建成； 沈建忠；

【机构】 中国农业大学动物医学院；

【摘要】 【目的】马杜霉素（maduramicin）是广泛用于肉鸡中的一类抗球虫药,其在肉鸡中残留会对公共健康造成潜在的威胁,本研究旨在通过建立快速、便捷、准确的方法来检测肉鸡中马杜霉素的药物残留。【方法】活化酯法（AE）和混合酸酐法（MA）将马杜霉素分别与牛血清白蛋白（BSA）、卵清蛋白（OVA）偶联,制备马杜霉素的3种免疫原和3种包被原,使用MD-EDA-BSA为免疫原,MD-OVAA为包被原,免疫Balb/C小鼠,制备能稳定分泌单克隆抗体的细胞株,利用制备的单抗与羧基磁珠偶联制备免疫磁珠,建立免疫磁珠净化-酶联免疫检测方法来检测鸡肉中马杜霉素的药物残留。【结果】成功制备单抗细胞珠2D₆和3B3₄,其效价分别为8.0×10⁴和3.2×10⁵,且对莫能菌素、盐霉素、甲基盐霉素、拉沙洛菌素均无交叉反应。成功制备免疫磁珠,免疫磁珠与抗原比为50mg/kg,磁珠稳定性良好。免疫磁珠净化-酶联免疫检测方法的LOD为0.5μg/kg,IC50值为1.78ng/mL,线性范围为0.16-25.67ng/mL,方法回收率在85.3-90.5%之间,变异系数在7.1-11.2%之间。【结论】通过对添加样本的检测,本研究建立的免疫磁珠净化-酶联免疫检测方法和液相色谱串联质谱检测法有良好的相关性（R=0.95）,该方法可以用于检测鸡肉中马杜霉素残留。更多还原