盐酸头孢噻呋在奶牛血浆中UPLC-MS/MS检测方法的建立与确证

【作者】 王建中； 孙菲菲； 张素霞； 龚晓会； 曹兴元；

【机构】 中国农业大学动物医学院；

【摘要】 【目的】头孢噻呋属于广谱半合成的第三代头孢菌素类抗生素,具有抗菌谱广、耐青霉素酶、临床疗效高、毒性低等优点,广泛应用于奶牛疾病的治疗。本实验通过将盐酸头孢噻呋在牛血浆中的主要代谢产物DFC衍生化为稳定DCA,并建立高效灵敏的UPLC-MS/MS检测方法,为研究盐酸头孢噻呋在牛体内的药代动力学特征提供支持。【方法】提取与衍生化:取样品血浆500μL,加标50μL,涡动10s,加0.4%二硫赤藓糖醇溶液5.5mL,涡动2min,50℃水浴振荡15min,取出放置室温,加14%碘乙酰胺溶液1.5mL,避光室温下静置衍生30 min,用25%的磷酸溶液调节pH至2.5-2.6,离心15min（4℃,6000r/min）;净化:依次用10 mL甲醇、10 mL水活化HLB萃取柱,取上清液过柱,用3 mL水淋洗小柱之后,用2.5 mL90%乙腈溶液洗脱,洗脱液于氮吹仪吹干,残余物用500μL0.2%的甲酸溶液复溶,过0.22μm滤膜,取5μL进仪器分析。色谱条件:C₁₈色谱柱（50×2.1 mm,2.6μm）,流动相为0.1%甲酸水溶液:0.1%甲酸乙腈溶液（95:5,V/V）,流速:0.4mL·min^-1,柱温30℃。质谱条件:ESI+,多反应监测,离子源温度150℃,脱溶剂温度450℃,毛细管电压3kV,脱溶剂气流速800L/h。在200μg/L,1000μg/L,2000μg/L三个浓度进行添加回收实验。【结果】血浆中DCA在100-5000μg/L的浓度范围内,方法线性关系良好,相关系数r²为0.9936。定量限（LOQ）和检测限（LOD）分别为10050μg/L和50μg/L。三个添加浓度的回收率在96.62%-106.06%;日内变异系数均小于6.45%,日间变异系数小于1.41%。待测物在冻融、室温、前处理后、在血浆中的稳定性试验检测的变异系数均低于15%。【结论】建立的UPLC-MS/MS方法满足分析检测要求。更多还原