番茄褪绿病毒RT-PCR检测技术的优化及河南分离物的分子鉴定

【作者】 冯佳； 孙晓辉； 高利利； 刘灵芝； 乔宁； 刘永光； 竺晓平；

【机构】 山东省蔬菜病虫生物学重点实验室山东农业大学植物保护学院； 潍坊科技学院蔬菜花卉研究所；

【摘要】 番茄是我国最主要的蔬菜之一,国内各地均有种植,随着栽培面积的不断扩大,病害发生的种类也不断增多。据报道,我国的春番茄每年因病毒病减产30%以上,夏、秋番茄损失更为严重,有的年份或有的地块几乎绝收。番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)隶属长线形病毒科(Closteroviridae)毛形病毒属(Crinivirus),除大洋洲和南极洲之外,其他各洲均有报道。该病毒近几年在我国各地相继暴发流行,发病初期易与缺素症混淆,常常因误诊而延误防治,给番茄生产造成严重的经济损失。目前国际上对番茄褪绿病毒的检测主要采用RT-PCR技术,所用到的引物设计各不相同,针对的靶标序列也各有侧重,开发和优化高效、准确的分子检测方法,在植株发病的早期能进行及时预警,有利于控制该病害的发生和传播流行。鉴于此,参考已报道的番茄褪绿病毒RT-PCR检测技术体系,对番茄褪绿病毒的RT-PCR引物、反应条件等进行了比较、筛选和优化,得到了稳定性强、灵敏度和特异性均较高的引物组合和最优反应条件。应用优化的RT-PCR检测技术体系对河南设施蔬菜产区采集的疑似番茄病样进行检测,经NCBI BLAST比对发现,河南分离物的CP和HSP70序列与GenBank上传的ToCV典型分离物序列的同源性均达97%以上,确定番茄褪绿病毒病在河南多个地区发生。同时通过对感病番茄样品中病毒粒子的提取和电镜观察,进一步证实河南设施番茄已感染ToCV。本研究通过对番茄褪绿病毒RT-PCR检测技术的优化,建立了快速、稳定、灵敏度高的ToCV检测技术,为日后检测该病毒提供了参考依据,同时确定了河南设施番茄感染番茄褪绿病毒。更多还原