PAPPA调控子宫内膜细胞表面岩藻糖基化促进其接受态

【作者】 于铭； 李宇林； 杨雪松； 刘帅； 燕秋；

【机构】 大连医科大学生物化学与分子生物学教研室辽宁省糖生物学与糖生物工程重点实验室；

【摘要】 目的研究PAPPA、IGFs在子宫内膜细胞中的表达、功能及糖分子生物学作用机制。方法1.Western Blot、ELISA方法检测子宫内膜细胞系HEC-1A、RL95-2中PAPPA的表达。2.Western Blot、ELISA、Real-timePCR、免疫荧光方法检测子宫内膜细胞系中IGFs(IGF-1、IGF1R、IGFBP1~6)的表达。3.PAPPA刺激子宫内膜细胞系后检测其与胚胎细胞JAR的黏附能力。4.PAPPA刺激子宫内膜细胞系后Western Blot、Real-time PCR、免疫荧光、流式方法检测子宫内膜细胞中FUT4、FUT7、poFUT1及其产物的表达5.构建IGFR过表达质粒6.将过表达IGFR质粒或者IGFR干扰序列转染子宫内膜细胞后,再用PAPPA刺激内膜细胞Western Blotting的方法检测其下游信号通路、以及黏附通路。结果1.PAPPA在子宫内膜细胞系HEC-1A、RL95-2中均有表达。2.IGF-1、IGF-1R在高接受态细胞RL95-2中表达均高于低接受态细胞HEC-1A、IGFBP3、IGFBP4、IGFBP6为两种细胞中主要表达的IGF结合蛋白。3.浓度为10ng/ml的PAPPA促进HEC-1A的黏附率由35%上升到75%(p<0.05)。4.PAPPA刺激内膜细胞HEC-1A后,FUT4、FUT7、poFUT1的表达均增加,呈时间剂量依赖性。5成功构建过表达IGFR过表达质粒。6.PAPPA刺激转染过表达IGFR的HEC-1A后黏附率比空载体对照提升到81%(p<0.05)、黏附通路黏附通路磷酸化p-FAK等升高。转染干扰序列IGFR的RL95-2后黏附率比无序对照相比由83%下降到68%(p<0.05),黏附通路磷酸化p-FAK等信号降低。结论1.子宫内膜细胞中FUT4、FUT7、poFUT1表达可能受PAPPA的影响。2.PAPPA可能参与调控子宫内膜的接受态为成功建立胚胎植入的重要细胞因子。更多还原